论文部分内容阅读
[目的]非小细胞肺癌(NSCLC)全球高发,为癌性死亡的首位原因,其驱动机制至今未阐明,给诊治带来诸多挑战。云南省为肺癌高发大省,亟待探索NSCLC特异性的驱动机制。剪接体功能异常可致下游基因差异剪接,进而参与肿瘤的发生。作为剪接体组装的关键复合物,SMN复合物的众多组分逐渐成为癌症的诊治靶点。但是GEMIN6基因编码蛋白作为SMN复合物的重要组分,其在NSCLC中发挥的角色仍是未解之谜。目前,SMN复合物的其他组分被证实参与癌细胞增殖等恶性生物学行为,甚至可调节自噬活性。与此同时,中国传统药物在NSCLC自噬活性的调节中逐渐崭露头角,日渐成为NSCLC用药的研究热点。因此,本研究拟从细胞及组织水平探讨GEMIN6与NSCLC恶性生物学行为的相关性,通过检测细胞增殖能力、迁移活性、周期进程以及自噬标志蛋白,旨在获得GEMIN6参与NSCLC增殖和迁移等恶性生物学行为的实验学证据,进一步探讨黄连素等传统中药单体是否可通过GEMIN6调控NSCLC的恶性进程,为云南地区NSCLC的诊治提供干预新靶点和治疗新思路。[方法]采用Westernblotting技术检测NSCLC细胞系中GEMIN6的基础表达量;利用siRNA敲减A549和H1975细胞系中GEMIN6的表达,Westernblotting技术验证敲减;通过MTS细胞增殖实验、Transwell实验、流式细胞术检测GEMIN6对NSCLC细胞生长的影响;采用Westernblotting技术验证自噬标记蛋白Beclinl和LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达水平改变;通过MTS法检测黄连素对A549细胞的半数抑制浓度;结合实验室前期研究结果,采用Westernblotting技术验证4类中药单体作用后A549细胞中GEMIN6及自噬标记蛋白Beclinl的表达水平改变;通过免疫组织化学方法和HE染色方法检测NSCLC的癌组织和良性对照组织中GEMIN6的表达水平,运用SPSS软件分析GENMIN6与NSCLC的临床相关性。[结果]1. Kaplan-Meier plotter生存曲线分析表明高表达GEMIN6的肺癌患者生存期较对照组低2. GEMIN6在NSCLC癌组织中表达高于对照组,但临床相关性不大3. GEMIN6增强NSCLC的增殖和迁移能力4. GEMIN6促进NSCLC发生G1-S期转变5. GEMIN6抑制NSCLC的自噬活性6.在A549细胞中,黄连素和姜黄素可升高GEMIN6以及Beclinl的表达;双氢青蒿素降低GEMIN6的表达并且轻度升高Beclinl的表达;红景天苷升高GEMIN6表达但对Beclinl的表达无影响。双氢青蒿素可能通过GEMIN6发挥其抑癌活性,但另外3种单体均非通过GEMIN6调控A549细胞的生长。[结论]在NSCLC中特异性高表达的GEMIN6通过促进G1/S期过渡,升高A549和H1975细胞的恶性增殖能力和迁移能力,同时抑制A549细胞的自噬活性;双氢青蒿素在下调A549细胞中GMEIN6表达的同时可轻度上调自噬水平,GEMIN6可能为其下游作用靶标;黄连素、姜黄素以及红景天苷可在不同程度上改变A549细胞中GEMIN6的表达,但无具体证据表明它们对NSCLC自噬活性的调控与GEMIN6表达水平改变相关。