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目的:利用16s rDNA测序技术检测黄芩治疗前后肠道菌群的变化,网络药理学预测黄芩治疗炎症性肠病的潜在作用靶点及代谢通路,通过现代生物学技术验证网络药理学预测结果,探讨黄芩治疗炎症性肠病的分子机制。方法:采用化学试剂诱导法建立炎症性肠病小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分组,即空白组、模型组、阳性药组、黄芩高浓度组、黄芩中浓度组和黄芩低浓度组,给药治疗28d,收集小鼠治疗前后的肠道内容物,利用16s rDNA测序技术对样品16S V3V4区进行扩增,通过OTU聚类统计、Alpha多样性、Beta多样性及群落组成等方法进行分析,研究黄芩治疗前后炎症性肠病小鼠肠道菌群结构的差异。通过TCMSP、TCM Database@Taiwan等数据库筛选得到黄芩有效成分及对应的潜在作用靶点,OMIM、Drugbank等数据库检索得到炎症性肠病对应的潜在靶标,利用C ystoscape3.6.0软件将二者进行映射,拓扑分析得到黄芩治疗炎症性肠病的潜在作用靶点及相关信号通路。最后利用Western blot技术检测黄芩治疗前后小鼠结肠组织中相关蛋白因子的表达水平。结果:肠道菌群检测结果显示模型组中Parasutterella、Parabacteroides、Citrobac ter等丰度明显减少,Akkermansia、Saccharibacteria、Acetatifactor、Turicibacter等丰度明显上调;黄芩给药组中Saccharibacteria、Acetatifactor等丰度明显下降,Parasut terella、Citrobacter等丰度呈上升趋势,且菌群丰度与黄芩浓度呈正比。利用网络药理学相关数据库筛选得到黄芩主要活性分子21个、成分对应靶点157个、疾病对应靶点320个;将成分靶点和疾病靶点映射,拓扑分析得到黄芩治疗炎症性肠病的潜在靶点29个,包括RELA、TNF、JUN、IL6、MAPK14、CASP3、IKBKB等;KE GG通路富集分析得148条信号通路,包括NF-κB、TNF信号通路等。Western blot技术检测结肠组织TNF、JUN、RELA和IL-6的蛋白表达水平,与空白组比较模型组中蛋白表达量明显上调,具有显著性统计学差异(P<0.01);与模型组比较阳性药组及黄芩高浓度组蛋白表达水平明显下降,有显著性统计学差异(P<0.01);阳性药组与黄芩高浓度组比较JUN和RELA表达水平无统计学差异(P>0.05),TNF和I L-6表达水平有统计学差异(P<0.05);阳性药组与黄芩中浓度组比较TNF、JUN、IL6表达水平有统计学差异(P<0.05),RELA表达水平有显著性统计学差异(P<0.01);阳性药组与黄芩低浓度组比较蛋白表达水平有显著性统计学差异(P<0.01)。结论:利用16s rDNA测序技术、网络药理学和Western blot技术证实黄芩可能通过调节肠道微生物的结构,增加有益菌的丰度,降低有害菌的丰度,进而缓解炎症反应,同时抑制炎症信号通路中RELA、TNF、JUN、IL6蛋白因子的表达水平,最终发挥治疗炎症性肠病的作用。