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研究背景:耐药与侵袭转移是临床上肺癌治疗失败的主要原因,研究表明表皮生长因子（Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR）非敏感突变和旁路信号通路激活(如间质-上皮细胞转化因子（Mesenchymal-epithelial transition factor,MET）基因扩增或肝细胞生长因子受体（Hepatocyte growth factor receptor,c-Met）蛋白过表达是介导肺癌耐药和侵袭转移的重要机制。中药QHF复方对肺癌有很好的治疗效果,但该复方对肺癌表皮生长因子突变的肺腺癌细胞株还未进行研究,因此本课题以肺腺癌耐药机制为依据,以肺癌突变细胞为研究对象,试图探究QHF复方是否可抑制肺腺癌突变株的侵袭转移过程。目的:探究中药QHF复方对肺腺癌突变细胞NCI-H1975增殖、侵袭迁移及相关蛋白表达的影响,进一步构建裸鼠腋下移植瘤模型,初步探究中药QHF复方抑制肺腺癌体内转移与EGFR、c-Met靶点及下游PI3K/AKT信号通路的关系。方法:1、体外实验:（1）MTT实验探究QHF复方与吉非替尼对肺腺癌细胞活力的影响;（2）倒置显微镜观察QHF复方对肺腺癌细胞形态的影响;（3）细胞划痕实验探究QHF复方对肺腺癌细胞迁移能力的影响;（4）Transwell实验探究QHF复方对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;（5）Western-blot检测QHF复方对肺腺癌细胞EGFR与cMet以及侵袭转移相关蛋白表达水平的影响。2、体内实验:（1）构建肺腺癌裸鼠腋下移植瘤模型,实验分组为模型组、QHF低剂量组、QHF高剂量组、吉非替尼组、c-Met抑制剂组,每组各10只;（2）给药期间观察裸鼠生理状态,测量裸鼠体重与腋下移植瘤体积变化情况,用抑瘤率评价各药物的抑瘤效果;（3）HE染色观察裸鼠肿瘤细胞形态变化和肿瘤肺脏转移情况;（4）免疫组织化学检测肿瘤组织中MMP-2与MMP-9的蛋白表达水平;（5）q RT-PCR检测肿瘤组织中EGFR与c-Met m RNA表达水平;（6）Westernblot检测肿瘤组织中EGFR、p-EGFR、c-Met、p-c-Met、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的蛋白表达水平。结果:1、（1）MTT实验结果表明,QHF复方可降低细胞活力,抑制细胞增殖,且具有药物浓度与时间依赖性;（2）倒置显微镜观察不同浓度QHF复方干预肺腺癌细胞后,细胞排列不规则,细胞间连接减少,形态不规则,部分细胞出现皱缩脱落,高浓度的QHF复方干预后,细胞开始出现凋亡;（3）划痕实验结果显示,QHF复方干预肺腺癌细胞后,细胞迁移能力受到抑制,具有药物浓度与时间依赖性;（4）Transwell实验结果显示,QHF复方与吉非替尼干预后,穿过小室膜与基质胶的细胞数量逐渐减少,与对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;（5）Western-blot结果显示,与对照组比较,不同浓度的QHF复方能抑制p-EGFR和p-c-Met的蛋白表达水平（P＜0.05或P＜0.01）,对EGFR与c-Met的表达无明显影响,QHF复方各剂量组能上调E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平,下调波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Snail）、碱性螺旋环-螺旋结构转录因子（Twist-1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。2、（1）成功构建裸鼠肺癌腋下移植瘤模型,给药结束后剥离各组裸鼠肿瘤,称取瘤重,各药物组的抑瘤率为:QHF低剂量组42.32%,QHF高剂量组58.77%,吉非替尼40.82%,cMet抑制剂56.26%;（2）HE染色结果显示模型组肿瘤细胞排列整齐,形态良好,无明显坏死和凋亡迹象,而QHF复方作用后,随着剂量的增加,细胞逐渐出现排列紊乱,并出现空泡变性及较大面积坏死,其中QHF高剂量组与c-Met抑制剂组肿瘤坏死情况最明显;HE染色显示模型组中裸鼠出现较大面积肺转移灶,而QHF复方各剂量能抑制裸鼠肺脏转移灶的大小;（3）免疫组织化学结果显示,与模型组相比,QHF复方可下调MMP-2与MMP-9的表达水平,且具有浓度依赖性,吉非替尼与c-Met抑制剂也均能抑制肿瘤组织中MMP-2与MMP-9的蛋白表达;（4）q RT-PCR结果显示,与模型组比较,QHF复方各剂量与吉非替尼均能够降低EGFR m RNA的表达;与模型组比较,QHF复方各剂量与c-Met抑制剂均能够降低c-Met m RNA的表达,具有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）;（5）Western-blot结果显示,与模型组比较,QHF复方与吉非替尼均能够抑制p-EGFR、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,且具有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,QHF各剂量与c-Met抑制剂均能够抑制p-c-Met、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平,且具有统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）。结论:中药QHF复方可抑制肺腺癌NCI-H1975细胞增殖、迁移与侵袭能力,能抑制裸鼠腋下移植瘤的肺转移和调控肿瘤侵袭转移相关蛋白的表达,这种作用可能是通过调控EGFR与c-Met靶点以及PI3K/AKT信号通路实现的。