海带内生菌DNN6蛋白生物活性及分离初步研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xuzhangzhe
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为了开发利用海洋为生物资源,以具有广谱的抑菌活性的海带(laminaria japonicaAresch)内生菌DNN6产生的粗蛋白为材料,对其抗肿瘤细胞活性、溶血活性、心血管活性和急性毒性进行评价,并对蛋白组分进行初步分离,取得结果如下:(1)DNN6蛋白对肿瘤细胞(白血病细胞K562,肝癌细胞HepG-2,乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231)和人脐静脉上皮细胞HuvEC均具有一定的抑制增殖的作用,其达到半数抑制(IC50)的DNN6蛋白浓度分别为58,126,126,127和115μg/ml。(2)DNN6蛋白能引起溶血,半数溶血剂量为3.6μg/ml。体内外溶血存在显著差异,血浆对DNN6蛋白引起的溶血具有保护作用。当红细胞悬液中存在PEG2000、PEG8000时,不同浓度DNN6蛋白所产生的溶血效应均显著受到抑制;DNN6蛋白使红细胞MDA水平呈剂量依赖性升高,因此孔道形成是DNN6蛋白非特异性细胞损伤活性的机制之一,脂质过氧化在DNN6蛋白损伤红细胞产生溶血效应中有一定作用。(3)DNN6蛋白对整体动物和离体心脏具有强心作用,作用时间较长,其强心活性有待深入。(4)小鼠急性毒性试验表现出全身乏力,蜷缩,迟钝,呆滞并且状态萎靡等现象,随着剂量增加症状加重,恢复时间延长,死亡率升高;DNN6蛋白对血清生化指标的影响轻微,心脏和肾脏发生明显脏器损伤,其他脏器也有不同程度的损伤,非特异性细胞损伤和抑制血红蛋白携带氧气的功能共同导致了多种严重的体内中毒症状,甚至小鼠的死亡。(5)蛋白活性组分的分离纯化,凝胶过滤层析,未检测到活性组分;强阴离子交换柱能够将DNN6蛋白中等电点不同的蛋白成功分离,发挥抑菌活性的主要蛋白分子量为55KD和36KD,有明显的抑菌活性。
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