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目的:通过提取、纯化得到香椿子多酚总提取物,并对其体外抗氧化作用进行研究;观察香椿子总多酚对链尿佐菌素诱导的糖尿病小鼠及大鼠的降血糖作用,并且从糖代谢、抗氧化及对胰腺的保护等方面对其降血糖机制进行研究。 方法:(1)提取、纯化及含量测定:香椿子进行适当粉碎、浸泡、75％乙醇提取, AB-8大孔树脂纯化,福林酚法测定多酚含量。 (2)采用还原K3Fe(CN)6法对香椿子总多酚提取物的总还原力进行测定,并测定香椿子总多酚对feton反应产生的羟基自由基(·OH)、邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子自由基(O2·-)和Fe2+诱发卵黄低密度脂蛋白(LDL)多不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化产生的烷氧基(LO·)和烷过氧基(LOO·)的清除作用,来研究香椿子总多酚的体外抗氧化作用。 (3)香椿子总多酚对糖尿病小鼠降血糖作用研究:昆明小鼠,雄性,随机分组,将其中一组(10只)作为正常对照组,其余禁食不禁水12h后,150mg/kg腹腔注射链尿佐菌素建立糖尿病模型,血糖大于11.1mmol/L者确定为糖尿病小鼠模型。将糖尿病小鼠模型随机分为5组,每组10只,分别为模型组、盐酸二甲双胍组、香椿子多酚高(100mg/kg)、中(80mg/kg)、低剂量(60mg/kg)组,给药14天,观察小鼠进食量、进水量及体重变化,14天后测定空腹血糖值,脏器系数,小鼠肝脏匀浆测定SOD、MDA、肝糖原含量。 (4)香椿子多酚对糖尿病大鼠降血糖作用研究:SD大鼠,雄性,随机分组,将其中一组(8只)作为正常对照,其余大鼠禁食不禁水12h后,腹腔注射链尿佐菌素55mg/kg,72h后测定空腹血糖,血糖值大于11.1mmol/L,确定为大鼠糖尿病模型。将成模的大鼠随机分为模型组、格列本脲组(10mg/kg)、香椿子多酚高(75mg/kg)、低剂量(45mg/kg)组。灌胃14天,灌胃期间记录大鼠进食量、进水量、尿量及体重变化,第14天后禁食不禁水12h,10％水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,离心取血清测定空腹血糖值(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)、血清胰岛素(INS)、C肽、大鼠血清氧化指标(血清SOD、MDA、NO);同时测定大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶;肝脏HE染色观察肝脏病理变化;胰腺多聚甲醛固定,切片、HE和免疫组化染色,观察胰岛结构及胰岛素表达。 结果:(1)经过纯化共得到香椿子多酚7.0145g,没食子酸标准曲线为Y=0.0607x+0.1503 R2=0.9924香椿子醇提取物中多酚含量为3.461％经树脂纯化后多酚含量为49.04％。 (2)香椿子多酚具有良好的还原能力,对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2·-)和烷氧基(LO·)和烷过氧基(LOO·)均有明显的抑制作用,且呈一定的量效关系。香椿子多酚对羟自由基、超氧阴离子自由基、和抗脂质过氧化清除活性 SC50值分别为:0.290mg/ml、65.62μg/ml、10.71μg/ml,比 Vit C清除自由基能力弱,但是总还原能力强于Vit C。 (3)香椿子多酚能降低链尿佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血糖,对正常小鼠血糖没有降低作用。香椿子多酚能降低糖尿病小鼠肝脏脏器指数,增加糖尿病小鼠肝糖原含量,可能机制为降低肝脏MDA含量,增加SOD含量。 (4):与模型组相比,香椿子多酚能够改善糖尿病大鼠症状,对糖尿病大鼠体重没有显著增高;降低FBG、GSP;提高INS和C肽含量;降低MDANO含量,提高SOD含量;改善大鼠胰岛形态,提示香椿子多酚对胰腺有保护作用;香椿子多酚不能降低ALT及AST含量;高剂量组能显著降低大鼠肝脏脏器指数,改善大鼠肝脏形态。 结论:香椿子多酚具有良好的抗氧化作用;能降低糖尿病小鼠血糖水平,降血糖机制可能与降低肝脏MDA含量,提高SOD含量有关;香椿子多酚能降低糖尿病大鼠FBG、GSP;提高INS及C肽含量;对糖尿病大鼠肝脏有保护作用;其降血糖作用机制可能与抗氧化、调节肝脏糖代谢及抑制胰岛细胞凋亡有关。