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乳腺癌是一类危害妇女健康的主要恶性肿瘤，其常规的治疗方法主要有手术、化疗、放疗和内分泌治疗等。其中，化疗对于术前缩小原发灶，术后预防复发和转移以及失去手术机会的晚期癌症的作用而显示出独特的地位。但与其它许多恶性肿瘤一样，乳腺癌的多药耐受(multidrug resistance，MDR)特性严重限制了化疗的实施。因此，深入探讨乳腺癌MDR的机制，对于识别耐药分子标志，开展以标志物为靶的药物筛选和基因治疗，提高化学治疗效果，具有重要的理论和应用价值。
MDR是指肿瘤细胞对某种抗肿瘤药物产生抗性的同时，对结构和作用机制不同的其它抗肿瘤药物也存在耐药的特性，其形成机制主要包括：多药耐药蛋白(如P-gp、MRP、BCRP等)表达增加，癌基因活化、抑癌基因失活，凋亡相关基因介导的凋亡通路受阻等。
人表皮生长因子受体2(human epideral growth factozreceptor，HER2/neu)是EGFR家族成员之一，具有内在酪氨酸激酶活性，在20一30[％]的乳腺癌中高表达，与乳腺癌的发生发展、浸润转移、治疗效果以及转归预后等密切相关。本室前期研究表明，HER2能介导乳腺癌细胞对部分药物的耐受，HER2高表达的乳腺癌细胞乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、生存素(Survivin)表达和端粒酶(telomerase)活性增高，而MDRl、MRPl、Top αⅡ和Bcl2的表达无明显改变。为进一步探讨HER2及其相关的BCRP、Survivin和telomerase在乳腺癌多药抗性中的作用和机制，本课题结合RNAi干扰技术，主要从以下4个方面展开研究。
1．HER2介导的耐药和耐药逆转
采用脂质体转染技术建立HER2稳定高表达的MCF一7/HER2细胞系和表达干扰细胞系MCF一7/HER2/Hi，RT-PCR和Western b1Ot检测HER2干扰前后BCRP、Survivin的表达及TRAP法检测端粒酶(telomerase)活性的变化；同时，采用MTT法观察细胞药物敏感性的变化。结果显示：(1)MCF-7/HER2细胞BCRP、Survivin的表达及telomerase活性均较对照组明显增加，对Taxo1、MMC、VP-16、5-Fu和Mit等5种化疗药物的耐受性分别是对照组的21，5.45，3.12，2.32和2.87倍(P<0.05)；(2)HER2表达干扰后，细胞BCRP、Survivin的表达均下调，telomerase活性降低，对Taxol、MMC、VP-16、5-Fu和Mit的敏感性比未干扰组分别提高了14.3，4.8，5.64，2.62和3.43倍(P<0.05)。结果提示HER2介导的耐药和耐药逆转与BCRP、Survivin的表达水平和telomerase活性相关。
2．HER2调节BCRP的作用机制
用pLNSX／HER2质粒与含有BCRP启动子的荧光素酶报告基因质粒共转染MCF-7细胞，单光子检测仪测定HER2对BCRP转录活性的影响；用P13K／AKT信号通路特异性的抑制剂LY294002处理MCF-7／HER2细胞，观察该细胞BCRP表达及耐药表型。结果显示：(1)HER-2可使BCRP报告基因中荧光素酶活性呈剂量依赖性增高(P<0.05)；(2)P13K／AKT抑制剂LY294002下调MCF-7／HER2细胞BCRP的表达，并同时提高细胞对5-Fu、VP-16、Mit的敏感性(P)分别提高3.42倍和2.33倍(P<0.05)，但对MMC、DDP、Dox的耐药性无明显改变(P>0.05)；(2)hTERT被干扰后的MCF-7／hTERT／hi细胞telomerase活性显著降低，对VP-16、Taxol的敏感性恢复(P<0.05)；恢复后的细胞在Taxol作用后克隆形成率降低27.4％(P<0.05)；凋亡抗性降低，干扰前后凋亡率分别为26±4.9％和61±8.5％，二者有显著差异(P<0.05)。结果提示telomerase介导了乳腺癌细胞对部分药物的耐受。
综上显示：BCRP、Survivin、Telomerase分别与乳腺癌细胞多药抗性的形成有关；HER2对三者的上调作用是其介导乳腺癌多药抗性的重要机制。本研究进一步揭示和验证了乳腺癌耐药新机制和新靶标，对深入阐述恶性肿瘤耐药的分子机制，筛选以HER2、BCRP、Survivin、Telomerase为靶标的乳腺癌耐药逆转新药，优化临床乳腺癌治疗方案具有重要的理论意义和应用价值。