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研究背景当胚胎发育到着床状态的时候,子宫内膜也由非接受态发展到接受态,这-极短的允许胚胎植入的时期称为“着床窗期”。多年来,通过不断改进控制性超促排卵方案和实验室胚胎培养技术,胚胎的数量和质量得到了极大优化,特别是1992年卵胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)技术应用于临床后,解决了很多由于精卵结合障碍带来的胚胎质量问题。但是体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)的植入率依然徘徊在30%左右,其中一个很重要的原因就是部分不孕症患者的着床窗期子宫内膜容受性存在缺陷,进而影响了胚胎的成功着床。目前多数学者认为移植次数≥3次或移植优质胚胎≥10个仍然未能妊娠者,可以称为胚胎反复移植失败(repeated implantation failure, RIF)。通常此类患者胚胎质量良好,没有其它明确的不孕因素可寻,子宫内膜容受性缺陷就成为其反复着床失败的最可能原因,如何预测并改善她们的子宫内膜容受性以提高再次助孕时的妊娠率,成为辅助生殖技术领域研究的热点与难点。近三十年,国内外学者们在子宫内膜容受性方面做了大量研究,发现了一系列影响子宫内膜容受性的激素、细胞因子和生长因子,这些因子之间关系错综复杂,构成一张庞大而井然有序的分子网络,双向调控互相影响。本次实验选取溶血磷脂酸受体3(lysophosphatidic acid receptor3,LPAR3)和肝素结合表皮生长因子(heparin-binding epidermal growthfactor,HB-EGF)为切入点进行子宫内膜容受性的相关研究.研究目的探讨RIF患者子宫内膜容受性下降的可能机制,探寻适合的评价指标,为改善子宫内膜容受性的临床干预措施提供相应的实验依据。材料与方法实验组(RIF组)23例为2010年10月-2011年6月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心就诊的胚胎反复移植失败患者。对照组31例为同期初次接受IVF助孕即妊娠的患者。子宫内膜的获取：在超促排卵前一个月经周期使用经阴道彩色多普勒超声监测卵泡,排卵后7天进行预移植,同时采集着床窗期子宫内膜。内膜采集后,分装为两份,第一份用10%中性福尔马林固定,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,制成切片,以备LPAR3与HB-EGF的免疫组织化学检测；第二份将吸取的新鲜内膜组织直接冻存于液氮中,等待进行LPAR3和HB-EGF mRNA的半定量RT-PCR检测。外周血的获取：获取子宫内膜的当日晨空腹抽取肘静脉血,采用化学发光法检查雌激素(estradiol,E2)和孕激素(progestogen,P)值。详细记录患者年龄,体重指数,移植周期数,不孕原因及类型,基础内分泌情况,着床窗口期E2值、P值和子宫内膜厚度,IVF周期超促排卵情况、获卵数和胚胎质量。数据分析采用SPSS17.0统计学软件。两组定量资料的比较,符合正态分布的采用两组独立样本t检验进行分析；非正态分布采用秩和检验。两组定性资料的比较采用四格表x2检验进行分析。相关性分析采用Pearson相关分析。以双侧α=0.05为检验水准。结果1.体重指数、不孕原因、不孕类型、基础状态(月经周期第2天-4天)血卵泡刺激素(follicle stimulatin ghormone, FSH)、黄体生成素(luteotropic hormone,LH)和E2水平、着床窗期血E2水平、子宫内膜厚度、垂体降调方案、实验室胚胎质量方面,两组患者的差异均无统计学意义。与对照组相比,RIF组患者的年龄(31.652±3.284vs.29.839±2.423,P=0.023)、促排卵药物(gonadotropin, Gn)使用天数(11.261±1.137vs.10.484±1.262,P=0.024)和剂量(2311.967±565.290vs.1930.694±511.993,P=0.012)均明显增高,而着床窗期血P水平(11.365±3.612vs.15.039±4.127,P=0.001)明显降低。2. LPAR3和HB-EGF在两组患者的子宫内膜中均有表达,且表达部位和特点上存在相似性,主要分布在子宫内膜腺上皮细胞和部分基质细胞的胞浆,呈顶浆分泌状。两者的平均光密度值比较,RIF组显著低于对照组(LPAR3:0.255±0.105vs.0.359±0.102,P=0.001;HB-EGF:0.298±0.126vs.0.554±0.197,P<0.001)。3.RIF组患者子宫内膜着床窗期LPAR3和HB-EGF mRNA低表达,灰度值比较显著小于对照组(LPAR3：0.481±0.167vs.0.647±0.177,P=0.001；HB-EGF:0.961±0.312vs.1.514±0.346,P<0.001)。4.两组的患者年龄与LPAR3和HB-EGF mRNA表达之间成负相关性P(LPAR3:r=-3.575,P<0.001;HB-EGF:r=-6.025,P<0.001)。根据目前的数据,尚不能认为Gn使用天数、Gn剂量、获卵数、着床窗期血E2和P值与两组LPAR3和HB-EGF mRNA表达之间存在显著相关性。结论1. LPAR3在子宫内膜着床窗期的表达部位及特点与HB-EGF相似,可以作为预测人子宫内膜容受性的良好参考指标。2.RIF患者着床窗期血清P水平降低、子宫内膜组织中LPAR3和HB-EGF低表达,可能是反复种植失败不孕的原因。3.随着患者年龄的增长,着床窗期子宫内膜组织中LPAR3和HB-EGF的表达降低。