目的:　　1.收集临床分离铜绿假单胞菌，利用特异性PCR检测qnrVC基因在菌株中的流行情况，并获得其全序列和亚型信息。　　2.以MLST与PFGE为主要方法，分析qnrVC阳性菌株的同源性，以获得qnrVC基因在临床菌株中流行与传播的克隆特征。　　方法:　　1.临床分离菌株收集　　收集来自广州医科大学附属第一医院、中山大学附属第二医院、广东医科大学附属第一医院及佛山市第一人民医院、顺德区第一人民医院临床分离铜绿假单胞菌1313株；并同时收集菌株临床信息及药敏结果进行分析。　　2.qnrVC基因的筛选与基因亚型的确认　　将收集菌株在血平板上进行复苏培养，用煮沸法提取细菌总DNA，用qnrVC基因特异性筛选引物进行PCR扩增，筛选出qnrVC阳性菌株。用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA，用qnrVC全序列引物对阳性菌株进行PCR扩增，PCR产物送DNA测序，测序后序列与NCBI数据库中已知qnrVC亚型序列比对，确认qnrVC基因的亚型。　　3.qnrVC阳性菌株同源性分析　　利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取qnrVC阳性菌株基因组DNA，然后按照MLST数据库推荐的七对引物进行管家基因片段的PCR扩增,扩增序列测序后提交至铜绿MLST数据库，可以得出各菌株的ST型。ST型数据用eBurst软件分析，可以得出qnrVC基因阳性株之间的同源性及是否存在克隆复合体及暴发流行。对qnrVC阳性菌株细　　菌总DNA用限制性内切酶Xbal I进行酶切，通过PFGE电泳，得到各菌株PFGE条带，使用BioNumberics软件分析结果并构建进化树，从而分析其同源性及克隆株。　　结果:　　1.（1）1313株铜绿假单胞菌中共检出20株铜绿假单胞菌含有qnrVC基因，阳性率约为1.5％，其中18株来自广州地区，2株分离自湛江地区，均为住院患者，其中重症医学科患者9例，占45%；呼吸科病人4例，占20%，其余患者3例来自外科，泌尿外科1例，妇科1例，心脏监护室1例，综合病区1例。阳性菌株来源患者性别分布无差异，年龄平均为68.7±10.9岁。　　（2）分析所有入选的铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为16.6%、15.4%，MIC浓度主要集中在0.25-0.5μg/ml和0.5-1μg/ml；而20株qnrVC阳性菌株的环丙沙星与左氧氟沙星的敏感性分别为44.4%、38.9%，MIC值集中于4μg/ml与8μg/ml。　　（3）qnrVC基因全序列扩增成功，测序并比对所得序列与已知qnrVC基因亚型，发现其中分离自广州地区的18株qnrVC基因为qnrVC6亚型，2株来自湛江地区菌株为qnrVC1亚型。　　2.20株qnrVC阳性铜绿假单胞菌可分为11个ST型，其中ST1182型4株（重症医学科2例，心脏监护1例，妇科1例），ST389型4株（重症医学科3例，外科1例），ST455型3株（重症医学科2例，综合区1例），ST274型2株，ST360型、ST303型、ST1337型、ST1661型、ST277型、ST1075型各一株，另有未定型ST一株。　　3． PFGE结果显示，ST389型、ST455型及ST274型电泳条带不同，即PFGE分型不一致；而A1、A2和A3菌株PFGE分型一致，结合三例患者临床资料确定此三株菌为ST1182型克隆株。　　结论:　　1.qnrVC基因已开始在铜绿假单胞菌临床分离菌株中传播；其中高龄重症患者为高危人群。qnrVC基因的存在可引起铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药率上升。　　2.本研究在广州地区分离株中检出qnrVC6亚型（18株），而湛江地区则检出qnrVC1亚型（2株），初步证明qnrVC基因的流行具有区域性和多样性。　　3. qnrVC阳性铜绿假单胞菌型别分布比较分散(11种ST型)，未呈集中趋势，亦未检测出易引起暴发的ST型（ST244、ST235、ST357），说明目前本研究区域尚未出现qnrVC阳性铜绿假单胞菌某一克隆株的暴发流行。其中 ST389、ST455及ST1182为相对优势型，ST1182型qnrVC阳性铜绿假单胞菌存在局部克隆播散现象。