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微藻因其遗传转化体系的匮乏，导致对微藻的基因功能研究的进展相当缓慢。本研究构建了一个多功能的微藻转化载体—pHY15。该载体包含2个基因表达盒，一个为筛选标记基因表达盒，另一为目的基因表达盒。筛选标记基因表达盒集成了真核和原核的表达盒，采用氯霉素酰基转移酶基因作为抗性筛选基因，其上游融合了来自大肠杆菌的P1启动子和三角褐指藻的硝酸还原酶基因启动子，下游融合了大肠杆菌ccdB终止子和三角褐指藻硝酸还原酶基因终止子。该融合表达盒使得氯霉素酰基转移酶基因既能在大肠杆菌中表达，又能在三角褐指藻中表达。该设计有效减小了表达载体的大小，便于载体的克隆操作以及高效的转化。目的基因表达盒，用于表达外源基因，采用三角褐指藻的高表达水平的fcpA基因的启动子及终止子。该表达盒内通过特别设计的2个XcmI内切酶位点引入了TA克隆的连接方式。XcmI酶切线性化的载体即可直接一个步骤克隆Taq聚合酶PCR的产物。在fcpA启动子的后面融合了一个Omega leader序列，有效提高外源基因的表达效率。在fcpA终止子的前面，融合了一个MYC标签序列，用作外源基因蛋白表达水平的检测。将绿色荧光蛋白（GFP）报告基因通过PCR以TA克隆方式克隆入构建的载体pHY15，电击转化三角褐指藻，对转化藻进行了抗性筛选，基因组DNA的PCR验证，证明GFP基因整合入藻基因组，通过实时定量qPCR分析表明GFP基因表达获得较高的mRNA表达水平，荧光显微结构观察证明了GFP在藻细胞内的表达,表达的eGFP蛋白占总可溶性蛋白达到0.14%。本研究创建的pHY15载体，既能用于基因正向插入获得基因表达，也可用于基因反向插入达到基因的反义抑制，对基因生物学功能的研究提供了有力的工具。该遗传转化体系在微藻的基因工程改造获得优良种质方面具有广泛的应用前景。