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目的建立条件性敲除视网膜Muller细胞来源血管内皮生长因子(VEGF)小鼠模型,为研究视网膜Muller细胞来源的VEGF在生理和病理状态下的作用提供实验依据。方法将视网膜Muller细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠和VEGF/loxP转基因小鼠进行杂交。从妊娠第15天(E15)至产后第1天(P1)给孕鼠喂食含2mg/ml强力霉素的5%的蔗糖。应用PCR技术检测P15小鼠尾巴总DNA中的Cre和VEGF基因,鉴定各小鼠基因型,根据结果将小鼠分为条件性VEGF敲除组(knockout, KO)和野生组(wildtype, WT); P21时应用Western blot和免疫荧光染色检测两组小鼠视网膜VEGF蛋白的表达及分布,FITC-dextran荧光造影检测两组小鼠视网膜血管形态；8个月时组织学切片观察两组小鼠视网膜形态。结果P21时,与WT小鼠相比,KO小鼠视网膜VEGF蛋白表达量减少了43.2%(p<0.001),免疫荧光结果显示减少的VEGF主要来自视网膜内核层,视网膜其他各层的VEGF表达无显著变化；荧光造影结果显示KO和WT小鼠视网膜血管的密度和形态无显著差异；8个月时,组织切片结果显示KO和WT小鼠视网膜总厚度以及外核层和内核层厚度的差异均无统计学意义(p>0.05)。结论本研究成功构建了条件性敲除视网膜Muller细胞来源VEGF的小鼠模型,可用于研究视网膜Muller细胞来源的VEGF的生理及病理性作用。目的探讨视网膜Muller细胞来源的VEGF对糖尿病诱导的视网膜炎症反应的影响。方法将KO和WT小鼠随机分为糖尿病和非糖尿病组。糖尿病组小鼠连续5天腹腔内注射链脲佐菌素(STZ),非糖尿病组小鼠则注射柠檬酸缓冲液,监测小鼠血糖和体重,血糖浓度高于300mg/dl的小鼠被视为糖尿病鼠。糖尿病模型诱导成功2个月后,Western blot检测各组小鼠视网膜VEGF、缺氧诱导因子(HIF-1α)及炎症因子细胞间粘附分子1 (ICAM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB (NF-κB)亚单位p65磷酸化形式(p-p65)的含量,免疫荧光染色法检测视网膜VEGF的表达及分布,通过计数视网膜血管内被荧光素标记的白细胞数目检测白细胞淤滞的严重程度。结果糖尿病模型诱导成功2个月后,与非糖尿病组小鼠相比,糖尿病组小鼠的血糖浓度明显升高,体重明显下降,差异有统计学意义(p<0.001)。糖尿病WT组与KO组之间,及非糖尿病WT组与KO组之间相比,血糖浓度和体重的差异无统计学意义(p>0.05)。在糖尿病状态下,敲除视网膜Muller细胞来源的VEGF可致VEGF的表达量减少约51.4%(p<0.001)。VEGF免疫荧光实验结果显示减少的VEGF主要来自内核层。HIF-1α在糖尿病KO和WT小鼠视网膜上表达量的差异无统计学意义(p>0.05)。在糖尿病状态下,条件性敲除视网膜Muller细胞来源的VEGF,使视网膜血管壁上粘附的白细胞数减少了74.5%,同时抑制了糖尿病诱导的TNF-α,ICAM-1和p-p65表达的上调,分别使其蛋白表达量降低52.9%,62.3%和48%。结论视网膜Muller细胞来源的VEGF对糖尿病引起的早期视网膜炎症反应起了关键和重要的作用,目的探讨视网膜Muller细胞来源的VEGF对糖尿病诱导的视网膜血管病变的影响。方法将KO和WT小鼠建成糖尿病模型。糖尿病模型诱导成功6个月后,Western blot和FITC-BSA荧光造影检测各组小鼠视网膜及玻璃体腔内渗漏的白蛋白的含量；Western blot和免疫荧光视网膜铺片检测各组小鼠视网膜紧密连接蛋白occludin和ZO-1的表达和分布；胰蛋白酶消化法检测各组小鼠视网膜无细胞毛细血管和周细胞数量。结果糖尿病模型成功诱导6个月后,与非糖尿病组小鼠相比,糖尿病组小鼠的血糖浓度明显升高,体重明显下降,差异有统计学意义(p<0.001)。糖尿病WT组与KO组之间,以及非糖尿病WT组与KO组之间相比,血糖浓度和体重的差异无统计学意义(p>0.05)。Western blot和FITC-BSA荧光造影结果均显示,敲除视网膜Muller细胞来源的VEGF可抑制糖尿病引起的视网膜血管的渗漏。Western Blot结果显示,敲除视网膜Muller细胞来源的VEGF能改善糖尿病引起的视网膜occludin与ZO-1表达的降低,使其表达量分别升高了59.7%和130.3%。ZO-1免疫荧光染色结果显示,正常小鼠视网膜内层的主要动脉干及其分支以及外层毛细血管的血管内皮细胞间有较多的ZO-1表达；糖尿病KO组小鼠视网膜上ZO-1的表达与分布无明显改变。敲除视网膜Muller细胞来源的VEGF能抑制糖尿病诱导的视网膜无细胞毛细血管的增多和周细胞的减少,分别使其数量降低43.43%和升高38.46%。结论视网膜Muller细胞来源的VEGF对糖尿病诱导的视网膜血管病变起了关键和重要的作用。