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抑癌基因是一类细胞生长的负调控基因,因基因缺失、突变等导致的其正常功能失活是细胞恶性转化的重要启动因素,ING1(Inhibitorofgrowth1;生长抑制(因子)-1)是最近发现的一种候选的抑癌基因,与正常组织相比ING1在不同肿瘤弱表达,p53基因是研究得最透彻同时也可能是目前发现的最重要的一种抑癌基因,因为人类所有肿瘤中发现约有50%存在p53突变,是肿瘤细胞基因改变频率最高的靶基因。在宫颈癌中,野生型p53基因失活是宫颈癌细胞发生发展的重要分子事件,p53基因丧失正常功能的原因除了p53基因突变产生突变型P53蛋白不能正常调节细胞生命活动外,另一个重要的因素便是与p53基因功能相关的基因网络不能正常发挥功能。另外,野生型p53基因与突变型p53基因在肿瘤细胞中相结合,使野生型p53基因丧失抑癌功能也是一个重要的因素。抑癌基因ING1通过不同的转录剪切方式翻译出四种不同分子量的蛋白质,其中P33ING1b蛋白是ING1基因的主要转录产物,与野生型p53基因编码蛋白关系密切,两者共同参与调节许多细胞生命活动过程,p33ING1b正常功能缺失或失活可能是正常宫颈组织恶性转化的重要分子机制。p33ING1b不是在p53介导的信号途径上游,而是作为“分子伴侣”与p53结合,在调节细胞生长过程中发挥协同作用的。研究已证实HPV16病毒癌基因编码E6蛋白与宫颈癌的关系密切。因此,研究p33ING1b与p53在HPV16感染的宫颈癌中的协同关系,可能对阐明宫颈癌的发生发展机制具有重要的理论意义,同时也可能为宫颈癌的基因治疗提供线索。
材料方法
首先选用80例宫颈癌组织,其中鳞癌68例,腺癌12例,相应的80例宫颈癌旁组织,距宫颈癌组织2cm;80例正常宫颈组织(所有标本取自子宫肌瘤切除的宫颈),免疫组化法观察三组p33ING1b与p53蛋白表达情况及相关性,检测HPV16在宫颈癌、癌旁组织和正常宫颈组织中的感染率,分析在宫颈癌中HPV16病毒癌基因编码E6蛋白表达与p53及p33ING1b蛋白表达的相关性;另选用38例宫颈癌标本,与之相对照的宫颈癌旁组织34例,正常宫颈组织46例,用RT-PCR法研究p33ING1bmRNA及p53mRNA在宫颈癌中的表达及相关性,同时探讨p33ING1bmRNA及p53mRNA与宫颈癌临床病理特征的关系及其在宫颈癌发生发展中可能的作用机制,为今后应用p33ING1b这一抑癌基因的基因治疗提供理论依据,并评价其作为宫颈癌预后指标的临床价值。所有数据均采用统计软件SPSS10.0进行处理,检验水准a=0.05。结果
1.P33ING1b在宫颈癌中表达阳性率为41.25%,宫颈癌旁组织阳性率为76.25%,正常组织阳性率为86.25%,宫颈癌组织与癌旁组织及与正常组织相比显著降低,均有统计学意义(P<0.01);P53在宫颈癌中表达阳性率为57.5%,宫颈癌旁组织阳性率为81.25%,正常组织阳性率为92.5%,宫颈癌组织与癌旁组织及与正常组织相比也显著降低,均有统计学意义(P<0.01)。
2.P33ING1b和P53蛋白在宫颈癌、癌旁及正常组织中表达明显相关(P<0.01)。
3.宫颈癌中HPV16编码E6蛋白与P33ING1b和P53蛋白之间均明显相关(P<0.01)。
4.宫颈癌中p33ING1bmRNA与正常组织、癌旁组织相比显著降低均有统计学意义(P<0.01);宫颈癌中P53mRNA与正常组织、癌旁组织相比也显著降低均有统计学意义(P<0.01);且p33ING1bmRNA与p53mRNA之间有明显的相关性(P<0.01)。
5.p33ING1bmRNA在宫颈癌不同分期中Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅱ期与Ⅲ期相比均有统计学意义(Ⅰ期与Ⅱ期P<0.05;Ⅰ期与Ⅲ期P<0.01;Ⅱ期与Ⅲ期P<0.01);在无淋巴转移组织的表达高于有淋巴转移组织(P<0.05);p33ING1bmRNA与宫颈癌不同组织类型、分化程度、患者年龄无关(P>0.05)。
6.p53mRNA在宫颈癌不同分期中Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅱ期与Ⅲ期相比均有统计学意义(Ⅰ期与H期P<0.05;Ⅰ期与Ⅲ期P<0.01;Ⅱ期与Ⅲ期P<0.05);在无淋巴转移组织的表达高于有淋巴转移组织(P<0.05);在不同分化宫颈癌中低分化与中分化、中分化与高分化相比均无统计学意义,而高分化与低分化相比有统计学意义(高分化与中分化P>0.05;高分化与低分化P<0.05;中分化与低分化P>0.05);P53mRNA与宫颈癌组织类型及患者年龄无关(P>0.05)。
结论
1.p33ING1bmRNA及p53mRNA广泛表达于正常的宫颈组织中,其表达蛋白定位于正常宫颈上皮细胞的细胞核中,提示p33ING1b在正常宫颈细胞中是广泛表达的抑癌基因,
2.p33ING1bmRNA与p53mRNA基因及蛋白表达下调,结合两者之间有明显的相关性,在细胞调节通路上发挥“分子伴侣”功能,说明此两者抑癌基因可能主要通过下调自身表达参与宫颈癌发生发展的分子事件,
3.p33ING1bmRNA与p53mRNA与蛋白表达水平基本呈平行关系,说明在从基因到蛋白的表达过程中,可能没有发生基因的大片段插入和缺失等变化。
4.HPV16在宫颈癌感染率明显高于正常宫颈组织,说明HPV16感染与宫颈癌关系密切。分析表明:HPV16病毒癌基因编码E6蛋白的表达与p53及p33ING1b蛋白表达之间均有相关性,提示三者在宫颈癌发生发展的协同作用中可能相互影响。5.p33ING1bmRNA与p53mRNA在宫颈癌的表达与肿瘤分期、淋巴转移有关,在宫颈癌分期趋向越晚,其相对表达趋向越低,在有淋巴转移的宫颈癌组织中表达较低,而且p53mRNA也与宫颈癌分化程度有关,在分化低的组织中表达较低,提示两者可能与宫颈癌的预后有着直接的关系。