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目的:LTF为我室鉴定的位于染色体3p21区域鼻咽癌候选易感基因,与鼻咽癌的发生、发展存在密切联系。本研究旨在探讨LTF基因SNPs分子标志与鼻咽癌患病风险之间的关系。
方法:以MassARRAY实验平台、辅以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,在800例鼻咽癌和800例正常对照人群中,对LTF基因的4个SNPs位点(rs1126477,rs1126478,rs2073495,rs9110)进行基因分型;然后利用SHEsis等软件分析该SNPs与鼻咽癌之间的关系,并构建其单体型分子标志。最后,利用real-time quantitative RT-PCR与western-blot技术检测其单体型分子标志与LTF基因mRNA和蛋白质表达水平之间的关系。
结果:rs2073495位点的C等位基因在鼻咽癌中的频率为62.5%、在正常对照人群中为53.7%,OR值为1.44(95%的可信区间为:1.09-1.89),该等位基因在病例与对照组之间分布有统计学差异(X2=6.68,p=0.0087<0.05),C等位基因为鼻咽癌患病风险因子,拥有该等位基因型的个体患鼻咽癌的可能性为不含该等位基因个体的1.44倍。rs9110位点的C等位基因在鼻咽癌中的频率为61.3%、在正常对照人群中为54.9%,其T等位基因频率分别为38.7%和45.1%,OR值为1.43(95%的可信区间为:1.05-2.02),该等位基因在病例与对照组之间分布有统计学差异(X2=6.57,p=0.010<0.05),C等位基因为鼻咽癌患病风险因子,拥有该等位基因型的个体患鼻咽癌的可能性为不含该等位基因个体的1.43倍。但rs1126477与rs1126478位点的等位基因频率分布在病例与对照组之间无统计学差异。
进一步分析发现rs2073495位点的CC、CG、GG等位基因型在鼻咽癌中的频率分别为0.384、0.482和0.134,在正常对照人群中为0.317、0.439和0.244,OR值为1.40(95%的可信区间为:1.06-2.15),该SNP位点的等位基因型在病例与对照组之间分布存在统计学差异(X2=8.73,p=0.012<0.05)。rs9110位点的CC、CT、TT等位基因型在鼻咽癌中的频率分别为0.381、0.480和0.139,在正常对照人群中为0.325、0.425和0.250,OR值为1.38(95%的可信区间为:1.03-1.96),该SNP位点的等位基因型在病例与对照组之间分布亦存在统计学差异(X2=9.33,p=0.0094<0.05)。
为揭示LTF基因单体型与鼻咽癌患病风险之间的关系,我们构建了rs1126477, rs1126478, rs2073495和rs9110位点的相关单体型、并进一步分析了各单体型与鼻咽癌之间的关联性。结果发现鼻咽癌患者拥有较低频率的A-G-G-T单体型(x2=21.25,p=4.12×10-6<0.001)。拥有A-G-G-T单体型的个体患鼻咽癌的可能性仅为非A-G-G-T单体型个体的0.322倍,95%的可信区间为:0.195~0.532。与正常对照人群比较分析,鼻咽癌患者拥有较高A-G-C-C单体型分布频率(x2=6.72,p=0.0095<0.01)。拥有A-G-C-C单体型的个体患鼻咽癌的可能性为非A-G-C-C单体型个体的1.47倍,95%的可信区间为:1.098~1.975。此外,G-A-C-C,G-A-G-T,G-G-C-C以及G-G-G-T等单体型在鼻咽癌患者和正常对照人群中分布频率无统计学差异(p>0.05)。以上结果提示A-G-G-T单体型为鼻咽癌患病保护性因子、而A-G-C-C单体型则为其患病风险因子。
为进一步研究LTF基因单体型与LTF表达水平之间的关系,我们对8例鼻咽癌活检组织和8例鼻咽部慢性炎症组织进行了LTF基因4个SNP位点(rs1126477,rs1126478,rs2073495,rs9110)基因分型、并利用real-time quantitative RT-PCR与western-blot技术检测其mRNA和蛋白表达水平。real-time quantitative RT-PCR结果显示:以内参基因GAPDH为标化标准,不论是在鼻咽癌组织还是鼻咽部慢性炎症组织中,A-G-G-T单体型个体有较高的LTF表达水平。在鼻咽癌组织中,拥有A-G-G-T单体型的个体其LTF表达水平是不拥有该单体型的1.58倍,而在鼻咽部慢性炎症组织中则为1.83倍。与此同时,western-blot检测也有相似的趋势存在,拥有A-G-G-T单体型的鼻咽癌患者和鼻咽部慢性炎症患者中LTF表达水平分别是不拥有该单体型个体的1.43倍和1.75倍。
结论:1.rs2073495与rs9110位点的等位基因频率在鼻咽癌和正常对照人群中分布存在差异,C等位基因均为鼻咽癌患病风险因子。同时发现rs2073495与rs9110位点的等位基因型在鼻咽癌和正常对照人群中分布存在差异。
2.单体型分析发现拥有A-G-G-T单体型的个体患鼻咽癌的可能性为非A-G-G-T单体型个体的0.322倍,提示A-G-G-T单体型为鼻咽癌患病保护性因子;而A-G-C-C单体型则为其患病的风险因子。
3.不论是在鼻咽癌组织还是鼻咽部慢性炎症组织中,A-G-G-T单体型个体有较高的LTF表达水平,提示A-G-G-T单体型与LTF基因表达水平之间存在密切关系。