随着人们对植物保护和可持续农业观念的不断加强,开发无污染、无公害的生物农药并应用于农业生产显得尤为重要,所以生防微生物抗植物病原菌的研究已成为一大热点。生防细菌种类繁多,分布广泛,是各种天然活性产物的重要来源途径。缺陷假单胞菌Pseudomonas diminuta HD13是贵州大学生化工程中心真菌室从微生物菌剂中分离得到的一种拮抗细菌,本实验以该菌株为材料,初步对菌株HD13抑菌稳定性以及其抑菌机理进行了研究。采用菌饼法,得知菌株HD13对几种植物病原真菌具有广谱抑菌活性,其中对水稻纹枯病、烟草黑胫病的抑制效果最好;通过单因素试验和正交试验,获得HD13菌株最佳培养基成分为:蔗糖20.0 g/L、牛肉膏7.0 g/L、氯化钠2.0 g/L、K2HPO4 4.0 g/L;菌株HD13的最佳吸收波长是460 nm;对其发酵条件优化表明,把菌株HD13的培养基初始调节为中性,接种量为8%,在30℃下110 r/min培养4.5 d,其抑菌效果最好,但摇床培养3 d再静置培养15 d,该培养方式更有利于发酵滤液中抗菌物质产生。菌株HD13的抗菌活性物质主要是胞外物,理化特性分析结果表明,发酵液稳定性高,对热、酸碱度紫光均不敏感,能长时间储存稳定,用50%~90%硫酸铵处理后,沉淀部分有较强的抑菌活性。初步探讨了发酵液OD值与生物量变化和抑菌活性的关系,建立了OD值与生物量变化和抑菌活性变化的直线回归方程:OD值与菌液中活菌数(y):y=1.5856x+0.0605,R2=0.9919;OD值与菌液湿重(y):y=7.2232x+1.0802,R2=0.9919;OD值与菌液干重(y):y=0.951x+0.0722,R2=0.9158;OD值与病原真菌抑制率(y):y=84.166x-3.9601,R2=0.9482。缺陷假单胞菌HD13发酵经过浓缩,正丁醇萃取所得粗提物的毒力回归方程为y=0.66x+5.01,R2=0.95,IC50为1.25 g/L。提取物分离纯化后得到两种具有强烈抑制水稻纹枯病的活性组分A、B,其中组分A的成分较单一,初步分析表明,组分A主要是脂肽或蛋白质类物质,组分B包含小分子物质。抑菌实验表明,组分A对4种植物病原真菌具有一定的抑制效果,其中对水稻纹枯病的抑制效果最好;组分A的IC50值为124μg/mL,MFC值是215μg/mL;组分A对水稻纹枯病菌丝形态具有致畸作用,可以破坏病原真菌细胞壁完整性和增大膜系统通透性;采用凝胶阻滞实验表明,组分A可与水稻纹枯病DNA在体外非特异性结合,说明组分A不仅作用于细胞质膜并且还可能作用于胞内其它目标物质。菌株连续培养7代后,其抑菌活性有所降低,并且产生本实验分离的主要物质不稳定,表明菌株连续培养多次后,抑菌活性以及产物受到明显影响。