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目的1.利用实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）检测147例晚期（TNM分期Ⅲ、Ⅳ期）非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）原发灶和与原发灶配对的71例淋巴结转移灶（即该71例转移灶与原发灶取自同一患者）中c-MET基因扩增的阳性率，并对比两者基因扩增的一致性，进而探讨用NSCLC淋巴结转移灶替代原发灶检测c-MET基因扩增的可行性，为NSCLC的c-MET基因扩增检测提供一种备选方案，以便临床上不易取得原发灶的NSCLC患者能够安全、方便、准确、及时的得到c-MET基因检测结果并接受相应的分子靶向药物治疗。2.通过Real-Time PCR方法检测147例晚期NSCLC原发灶和71例配对淋巴结转移灶的c-MET基因扩增情况，结合NSCLC患者相应基线资料，分析c-MET基因扩增与NSCLC患者性别、年龄、吸烟情况及病理类型等之间的关系。方法1.收集2011年11月到2013年11月北京军区总医院、山西医科大学附属医院、中国人民解放军第一附属医院、浙江省肿瘤医院4个三级甲等医院经病理科确诊为晚期NSCLC患者的原发灶手术标本或穿刺标本147例，其中71例配对淋巴结转移灶标本，另收集正常肺组织标本47例作为对照组。并整理所有患者的基线资料，包括患者性别、年龄（高龄组、低龄组）、吸烟情况及病理类型。2.使用Real-Time PCR检测所有标本c-MET基因扩增情况，得出中国部分NSCLC人群c-MET基因扩增阳性率。3.使用SPSS19.0分析原发灶与淋巴结转移灶c-MET扩增的一致性、c-MET扩增阳性与临床基线资料间的关系。结果1. NSCLC患者c-MET基因扩增阳性率检测NSCLC患者的原发灶组织，经过统计NSCLC患者c-MET基因扩增阳性率为8.84%（13/147）。2.NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的差异性比较c-MET扩增阳性率配对原发灶为8.45%（6/71），配对淋巴结转移灶为18.31%（13/71）。配对的71对原发灶、转移灶组织中，原发灶扩增阳性6例，转移灶扩增阳性13例，转移灶扩增阳性而对应的原发灶扩增阴性8例，原发灶扩增阳性而对应的转移灶扩增阴性1例，淋巴结转移灶扩增阳性率高于原发灶，两组间差异有统计学意义（McNemar检验,p=0.039）。3. NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的一致性比较用淋巴结转移灶预测原发灶c-MET扩增阳性，其一致性良好（kappa=0.464, p＜0.001），通过淋巴结转移灶判断原发灶扩增情况，灵敏度为83.3%（5/6），特异度为87.7%（57/65）。原发灶和淋巴结转移灶两组间c-MET基因扩增阳性率有统计学差异，但是一致性良好，说明淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的，它是对原发灶扩增情况的一个放大。4. NSCLC患者原发灶和淋巴结转移灶c-MET基因扩增与临床特征的关系（1）147例NSCLC原发灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为10.6%和7.1%（p＝0.489），在高龄（≥60岁）和非高龄（＜60岁）两个亚组当中分别为7.1%和11.3%（p＝0.372），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.8%和3.1%（p＝0.213），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.2%和10.1%（p＝0.362），均无统计学差异。即在NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟史及病理类型无关。（2）71例NSCLC配对原发灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为8.6%和8.3%（p＝1.000），在高龄和非高龄两个亚组当中分别为7.3%和10.0%（p＝0.692），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.1%和3.6%（p＝0.142），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.0%和10.9%（p＝0.414），均无统计学差异。即在配对的71例NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟史及病理类型无关。（3）71例NSCLC配对转移灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为28.6%和8.3%（p＝0.035），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为28.2%和6.3%（p＝0.029），差异均存在统计学意义。在高龄和非高龄两个亚组当中分别为17.6%和23.3%（p＝0.371），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为8.0%和23.9%（p＝0.414），差异均无统计学意义。即在NSCLC配对转移灶当中c-MET扩增在男性、吸烟患者明显升高：出现N2以上淋巴结转移患者的淋巴结转移灶组织中，男性为28.6%（10/35）存在扩增，吸烟患者为28.2%（11/39）存在扩增，其中男性吸烟患者味30.4%（7/23）存在扩增。结论1.参与本次实验中国人群NSCLC患者的肿瘤组织原发灶中c-MET基因扩增阳性率为8.84%，较国外文献报道偏高，与国内报道的阳性率并不一致，但本次结果在国内报道阳性率的范围内，由此预测中国人群c-MET基因扩增率高于欧美人群。考虑到针对c-MET基因扩增的分子靶向药物治疗可以使近十分之一的NSCLC患者获益，故c-MET基因扩增检测应当同EGFR、EML4-ALK等共同作为NSCLC的常规基因检测项目。2.在原发灶和淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率并不相同，淋巴结转移灶高于原发灶。考虑到淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的，发生淋巴结转移能够放大原发灶扩增的情况。原发灶扩增阳性者淋巴结转移灶扩增更加明显，原发灶未发生扩增者淋巴结转移灶亦无明显扩增，原发灶只是发生轻度扩增而导致无法检出者，淋巴结转移灶会发生较明显的扩增，从而将这部分c-MET扩增患者检出。多数原发灶c-MET扩增阳性的患者，淋巴结转移灶扩增也为阳性，灵敏度和特异度均较高，一致性良好。因而，对淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增检测能筛出更多有适应症的患者。以往的分子靶向治疗经验已证明，无论是原发灶还是转移灶出现基因突变，都可以作为相应分子靶向药物治疗的适应症。综上所述，用淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测，效果优于原发灶。3.本次研究当中发现c-MET基因扩增在原发灶与基线资料无关，但在淋巴结转移灶男性患者高于女性患者，吸烟患者高于不吸烟患者，提示对于存在N2级以上淋巴结转移的男性吸烟患者，c-MET基因扩增检测对其有非常重要的临床诊疗价值，对于这类型的患者，如果有可能，均应对其淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测。