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目的1.利用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测147例晚期(TNM分期Ⅲ、Ⅳ期)非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)原发灶和与原发灶配对的71例淋巴结转移灶(即该71例转移灶与原发灶取自同一患者)中c-MET基因扩增的阳性率,并对比两者基因扩增的一致性,进而探讨用NSCLC淋巴结转移灶替代原发灶检测c-MET基因扩增的可行性,为NSCLC的c-MET基因扩增检测提供一种备选方案,以便临床上不易取得原发灶的NSCLC患者能够安全、方便、准确、及时的得到c-MET基因检测结果并接受相应的分子靶向药物治疗。2.通过Real-Time PCR方法检测147例晚期NSCLC原发灶和71例配对淋巴结转移灶的c-MET基因扩增情况,结合NSCLC患者相应基线资料,分析c-MET基因扩增与NSCLC患者性别、年龄、吸烟情况及病理类型等之间的关系。方法1.收集2011年11月到2013年11月北京军区总医院、山西医科大学附属医院、中国人民解放军第一附属医院、浙江省肿瘤医院4个三级甲等医院经病理科确诊为晚期NSCLC患者的原发灶手术标本或穿刺标本147例,其中71例配对淋巴结转移灶标本,另收集正常肺组织标本47例作为对照组。并整理所有患者的基线资料,包括患者性别、年龄(高龄组、低龄组)、吸烟情况及病理类型。2.使用Real-Time PCR检测所有标本c-MET基因扩增情况,得出中国部分NSCLC人群c-MET基因扩增阳性率。3.使用SPSS19.0分析原发灶与淋巴结转移灶c-MET扩增的一致性、c-MET扩增阳性与临床基线资料间的关系。结果1. NSCLC患者c-MET基因扩增阳性率检测NSCLC患者的原发灶组织,经过统计NSCLC患者c-MET基因扩增阳性率为8.84%(13/147)。2.NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的差异性比较c-MET扩增阳性率配对原发灶为8.45%(6/71),配对淋巴结转移灶为18.31%(13/71)。配对的71对原发灶、转移灶组织中,原发灶扩增阳性6例,转移灶扩增阳性13例,转移灶扩增阳性而对应的原发灶扩增阴性8例,原发灶扩增阳性而对应的转移灶扩增阴性1例,淋巴结转移灶扩增阳性率高于原发灶,两组间差异有统计学意义(McNemar检验,p=0.039)。3. NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的一致性比较用淋巴结转移灶预测原发灶c-MET扩增阳性,其一致性良好(kappa=0.464, p<0.001),通过淋巴结转移灶判断原发灶扩增情况,灵敏度为83.3%(5/6),特异度为87.7%(57/65)。原发灶和淋巴结转移灶两组间c-MET基因扩增阳性率有统计学差异,但是一致性良好,说明淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的,它是对原发灶扩增情况的一个放大。4. NSCLC患者原发灶和淋巴结转移灶c-MET基因扩增与临床特征的关系(1)147例NSCLC原发灶当中,c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为10.6%和7.1%(p=0.489),在高龄(≥60岁)和非高龄(<60岁)两个亚组当中分别为7.1%和11.3%(p=0.372),在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.8%和3.1%(p=0.213),在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.2%和10.1%(p=0.362),均无统计学差异。即在NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟史及病理类型无关。(2)71例NSCLC配对原发灶当中,c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为8.6%和8.3%(p=1.000),在高龄和非高龄两个亚组当中分别为7.3%和10.0%(p=0.692),在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.1%和3.6%(p=0.142),在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.0%和10.9%(p=0.414),均无统计学差异。即在配对的71例NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟史及病理类型无关。(3)71例NSCLC配对转移灶当中,c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为28.6%和8.3%(p=0.035),在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为28.2%和6.3%(p=0.029),差异均存在统计学意义。在高龄和非高龄两个亚组当中分别为17.6%和23.3%(p=0.371),在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为8.0%和23.9%(p=0.414),差异均无统计学意义。即在NSCLC配对转移灶当中c-MET扩增在男性、吸烟患者明显升高:出现N2以上淋巴结转移患者的淋巴结转移灶组织中,男性为28.6%(10/35)存在扩增,吸烟患者为28.2%(11/39)存在扩增,其中男性吸烟患者味30.4%(7/23)存在扩增。结论1.参与本次实验中国人群NSCLC患者的肿瘤组织原发灶中c-MET基因扩增阳性率为8.84%,较国外文献报道偏高,与国内报道的阳性率并不一致,但本次结果在国内报道阳性率的范围内,由此预测中国人群c-MET基因扩增率高于欧美人群。考虑到针对c-MET基因扩增的分子靶向药物治疗可以使近十分之一的NSCLC患者获益,故c-MET基因扩增检测应当同EGFR、EML4-ALK等共同作为NSCLC的常规基因检测项目。2.在原发灶和淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率并不相同,淋巴结转移灶高于原发灶。考虑到淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的,发生淋巴结转移能够放大原发灶扩增的情况。原发灶扩增阳性者淋巴结转移灶扩增更加明显,原发灶未发生扩增者淋巴结转移灶亦无明显扩增,原发灶只是发生轻度扩增而导致无法检出者,淋巴结转移灶会发生较明显的扩增,从而将这部分c-MET扩增患者检出。多数原发灶c-MET扩增阳性的患者,淋巴结转移灶扩增也为阳性,灵敏度和特异度均较高,一致性良好。因而,对淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增检测能筛出更多有适应症的患者。以往的分子靶向治疗经验已证明,无论是原发灶还是转移灶出现基因突变,都可以作为相应分子靶向药物治疗的适应症。综上所述,用淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测,效果优于原发灶。3.本次研究当中发现c-MET基因扩增在原发灶与基线资料无关,但在淋巴结转移灶男性患者高于女性患者,吸烟患者高于不吸烟患者,提示对于存在N2级以上淋巴结转移的男性吸烟患者,c-MET基因扩增检测对其有非常重要的临床诊疗价值,对于这类型的患者,如果有可能,均应对其淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测。