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多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)Cp-S316是本实验室从泰山土壤中分离获得的一株拮抗细菌(GenBank注册号：AY292989)。该菌株抗菌谱广,对多种动植物病原细菌和真菌都具有良好的抑制或杀灭作用,发酵性状优良,发酵可产生多组分的抗细菌环肽类活性物质,同时也能产生抗真菌的活性物质,而且,发酵配方不同,所产生的两类活性物质的产量差异较大。本实验室已对该菌产生抗真菌活性物质的发酵条件以及发酵配方进行了优化。本试验在前期工作的基础上对Cp-S316野生菌株进行了紫外诱变,获得了抗真菌生物活性较野生菌株高的突变株；对Cp-S316菌株产生的抗真菌活性物质进行了分离纯化与制备,主要结果如下。1、多粘类芽孢杆菌Cp-S316的紫外诱变Cp-S316菌株对紫外线敏感,照射20s时,致死率达到95.3%,选择20s作为最佳诱变时间；通过对诱变菌株的预筛、初筛和复筛,共筛选获得6株发酵液效价明显高于野生菌株的突变株,菌株编号分别为c16、d39、d56、e19、h41、h44,其效价较出发菌株分别提高了1.23倍、1.3倍、1.42倍、1.36倍、1.41倍和1.25倍,连续转接五代,经方差分析,c16、d56、h41、h44前后五代的效价无显著性差异,遗传性稳定。2、抗真菌活性物质的分离纯化与制备选用X-5大孔吸附树脂对活性物质进行吸附,树脂与发酵液的比例为1：20(m／v),静态吸附4h,吸附率为85%；解吸剂为0.01 mol／LHCl-70%乙醇,以解吸剂：树脂=2：1(v:m)动态解吸,解吸率达到82%；甲醇抽提活性物质,回收率为62%；活性物质经CM Sepharose FF离子交换柱层析,0～0.5mol／LNaCl梯度洗脱得到活性物质洗脱峰,收集活性物质经SephadexG25分子筛层析得到活性物质的中间纯化物;利用RP-HPLC进行活性物质的精制,最佳色谱条件为：乙腈：0.1%三氟乙酸水溶液=22：78(v／v)；色谱柱SinoChrom ODS-BP C18柱(4.6×250mm,5μm),流速0.5mL／min,检测波长为210nm,柱温30℃,进样量20μL。按照分析HPLC条件,进行制备色谱,色谱柱为Venusil XBP C18柱(20×250mm),流速为5ml／min,进样量10ml,检测波长为210nm,分离得到保留时间(Rt)分别为14.32min和18.12min的两个抗真菌活性物质组分,对两个组分进行了多次制备,用UPLC检测其纯度,均为单一峰。