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广州管圆线虫病是一种人畜共患的寄生虫病。它是因人进食含有广州管圆线虫感染期幼虫的食物或水源而引起的。随着人们饮食习惯的改变和水陆交通的日趋发达,该病的流行呈逐年上升的趋势,目前尚无理想的特效药对该病进行防治。虾红素金属蛋白酶是金属蛋白酶家族的一员,研究发现,其在寄生虫寄生生活中发挥一系列不同的生物学功能。但是目前国际上,关于广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶的报道几乎没有。 本研究为探索广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶在虫体中的功能,对其基因进行调取,我们通过虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆,最终获得广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全长基因,并将其命名为Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease)。成功克隆的Ac-ALMP序列全长1823 bp,其开放阅读框共编码562个氨基酸。开放阅读框分析结果表明Ac-ALMP与其他虾红素家族成员具有类似结构域,具有信号肽、前肽区、锌金属肽酶功能域(HEXXHXXGFXHEXXRXDRD)、Met-turn结构(SXMXY)、EGF-1区域和CUB区域等虾红素家族经典结构。进化树分析表明Ac-ALMP基因的核酸序列与Dictyocaulus viviparous同源性最高。 在寄生虫中大多数金属蛋白酶的分布与其功能是相对应的,因此我们利用制备的Ac-ALMP多抗血清对广州管圆线虫L1,L3和成虫进行免疫组织定位及利用Real-time PCR进行Ac-ALMP定量分析。定量结果显示Ac-ALMP在各期中均有表达,其中L1相对表达量最高,L3次之,推测Ac-ALMP在寄生过程中起重要作用。免疫荧光定位分析结果发现,Ac-ALMP在广州管圆线虫的各期中主要分布于消化道(肠道与食道)。我们推测该蛋白在寄生虫营养摄取过程中起重要作用。 综上,本研究对Ac-ALMP蛋白进行原核及真核表达,为广州管圆线虫病的诊断提供抗原;通过对Ac-ALMP在虫体定位的研究,我们进一步推测Ac-ALMP在广州管圆线虫中的功能,进一步为广州管圆线虫病的防治及疫苗开发提供参考。