广州管圆线虫金属蛋白酶基因的克隆、表达及免疫组织定位分析

来源 :中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangy3874308
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
广州管圆线虫病是一种人畜共患的寄生虫病。它是因人进食含有广州管圆线虫感染期幼虫的食物或水源而引起的。随着人们饮食习惯的改变和水陆交通的日趋发达,该病的流行呈逐年上升的趋势,目前尚无理想的特效药对该病进行防治。虾红素金属蛋白酶是金属蛋白酶家族的一员,研究发现,其在寄生虫寄生生活中发挥一系列不同的生物学功能。但是目前国际上,关于广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶的报道几乎没有。  本研究为探索广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶在虫体中的功能,对其基因进行调取,我们通过虾红素金属蛋白酶EST序列设计引物进行RACE克隆,最终获得广州管圆线虫虾红素金属蛋白酶全长基因,并将其命名为Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease)。成功克隆的Ac-ALMP序列全长1823 bp,其开放阅读框共编码562个氨基酸。开放阅读框分析结果表明Ac-ALMP与其他虾红素家族成员具有类似结构域,具有信号肽、前肽区、锌金属肽酶功能域(HEXXHXXGFXHEXXRXDRD)、Met-turn结构(SXMXY)、EGF-1区域和CUB区域等虾红素家族经典结构。进化树分析表明Ac-ALMP基因的核酸序列与Dictyocaulus viviparous同源性最高。  在寄生虫中大多数金属蛋白酶的分布与其功能是相对应的,因此我们利用制备的Ac-ALMP多抗血清对广州管圆线虫L1,L3和成虫进行免疫组织定位及利用Real-time PCR进行Ac-ALMP定量分析。定量结果显示Ac-ALMP在各期中均有表达,其中L1相对表达量最高,L3次之,推测Ac-ALMP在寄生过程中起重要作用。免疫荧光定位分析结果发现,Ac-ALMP在广州管圆线虫的各期中主要分布于消化道(肠道与食道)。我们推测该蛋白在寄生虫营养摄取过程中起重要作用。  综上,本研究对Ac-ALMP蛋白进行原核及真核表达,为广州管圆线虫病的诊断提供抗原;通过对Ac-ALMP在虫体定位的研究,我们进一步推测Ac-ALMP在广州管圆线虫中的功能,进一步为广州管圆线虫病的防治及疫苗开发提供参考。
其他文献
近年来研究报道指出:V1区神经元传统感受野和空间整合范围依赖于刺激的对比度。我们重新检查了48个猫V1区神经元的这些特征,观察到:所有这些细胞都具有固定的传统感受野大小,而它
学位
本文通过土培试验和水培试验,研究了DEHP高/低吸收累积基因型差异的菜心品种油青60天菜心和特青60天菜心在根系构型、解剖结构、土壤微生物和酶等特征差异以及对菜心吸收累积D
学位
学位
学位
在许多生物地球化学循环过程中硅元素可以在不同时间尺度上与碳元素发生耦合作用,硅、碳耦合循环的关键过程主要有植硅体固碳作用和硅酸盐风化作用。植硅体在形成的过程中可以
学位
随着超宽光谱技术的迅速发展,宽谱光源越来越受到人们的关注,在国内外都有着广泛研究与应用。由于它具有宽光谱,高强度,高空间相干度等优点而被应用于光纤通信,化学物质与气体探测
学位