圆圈病毒3型(GyV3)对鸡和小鼠致病特性研究

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鸡病毒性传染性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis,TVP)是通常发生于肉鸡群的一种病毒性传染病,可显著降低肉鸡生产性能,给肉鸡养殖业造成巨大经济损失,已成为困扰肉鸡养殖业的重要难题,但其病因却众说纷纭。2018年,本实验室首次从患有TVP的白羽肉鸡中分离鉴定了圆圈病毒3型(Gyrovirus 3,GyV3),并通过回顾性流行病学调查以及动物回归实验,证实GyV3是引起TVP的重要病原。GyV3为单链环状DNA病毒,属于细环病毒科(Anelloviridae)圆圈病毒属(Gyrovirus)。2012年,美国学者Phan首次从患有胃肠炎的儿童腹泻粪便中检测到GyV3,但后续未检测到其来源,本实验室在国内调查了300余份儿童腹泻病料,未发现GyV3感染。GyV3与人和鸡的关系仍缺乏衔接。那么GyV3能否感染哺乳动物小鼠?对小鼠能否产生致病性?还未可知。为解决此问题,我们以鸡和小鼠作为实验动物,通过致病性实验和病毒传播实验,深入研究GyV3致病特性及传播模式,为GyV3的防控提供科学依据。为明确GyV3在鸡群和鼠群中的传播方式,建立了GyV3感染鸡水平传播和先天感染模型及GyV3感染鼠水平传播模型。将1日龄SPF雏鸡腹腔接种GyV3-SDAU-1株为直接感染组,腹腔接种PBS并直接感染组同居饲养为接触感染组,腹腔接种PBS并单独饲养为对照组,建立GyV3感染鸡水平传播模型;鸡胚6胚龄卵黄囊接种GyV3-SDAU-1株作为先天感染组,卵黄囊接种PBS作为对照组,孵育至出壳,隔离饲养,建立GyV3鸡的先天感染模型;将4周龄BALB/c幼鼠腹腔接种GyV3-SDAU-1株为直接感染组,腹腔接种PBS并跟直接感染组同居饲养为接触感染组,腹腔接种PBS并单独饲养为对照组,建立GyV3感染鼠水平传播模型。通过临床观察、大体剖检观察、血像观察、病理组织学观察和免疫组织化学检测对GyV3在鸡群和鼠群中的传播方式和传播比例进行检测。结果显示:GyV3可在鸡群中水平传播,水平传播感染率为50%,死亡率为12.5%,先天感染率为100%,死亡率为0,GyV3先天感染能力要高于接触感染能力;GyV3可在鼠群中水平传播,水平传播感染率为50%,小鼠无死亡,GyV3对小鼠致病能力较低。为研究GyV3对鸡和小鼠的致病性并比较二者的差异,本研究同时建立了GyV3人工感染鸡和小鼠动物模型。将1日龄SPF雏鸡和4周龄BALB/c幼鼠,腹腔接种GyV3-SDAU-1株作为直接感染组,腹腔接种PBS并隔离饲养作为对照组,通过临床观察、大体剖检观察、血像观察、病理组织学观察、病毒载量检测和病毒分布检测对其致病特性进行研究。GyV3感染鸡临床表现为精神萎靡、呆滞,生长迟缓、发育不良;大体剖检可见各组织脏器色泽较淡,腺胃肿大、腺胃乳头肿大黏连,骨髓苍白,法氏囊发育不良;感染率为81.82%,死亡率为21.86%;血像观察可见幼红细胞和异嗜性白细胞明显增多;病理组织学观察可见腺胃粘膜层和腺管间弥漫性淋巴细胞浸润、腺胃乳头导管闭锁,十二指肠黏膜上皮细胞增生,肾脏髓质集合小管上皮细胞变性坏死,肾上腺和睾丸实质内炎性灶散在分布;病毒载量检测,结果显示,14dpi、21dpi、28dpi肾上腺、睾丸和骨髓载量均较高,而腺胃和脾脏的载量均较低,并且各组织载量在21dpi高于14dpi和28dpi;免疫组织化学检测GyV3在体内的分布,结果显示肾脏、大脑、十二指肠、法氏囊、肾上腺检测到阳性信号。GyV3感染小鼠临床表现为食欲低下、生长迟缓;大体剖检可见各脏器色泽较淡;感染率为41.67%,无死亡现象;血像观察可见红细胞中央折光区增大,仅红细胞边缘着色,血小板明显增多;病理组织学观察可见肝脏中肝细胞弥漫性空泡变性、坏死,肾脏肾小管间局部出血,睾丸生殖细胞减少,脾脏中巨核细胞增多,胃局部可见炎性灶,十二指肠中央乳糜管间大量细胞增生;病毒载量检测,结果显示,14dpi、21dpi、28dpi睾丸和大脑载量均较高,胃和脾脏载量均较低,并且各组织载量在21dpi高于14dpi和28dpi;免疫组织化学检测GyV3在体内的分布,结果显示,胃、大脑和睾丸检测到阳性信号。通过对比GyV3感染鸡和小鼠致病特性发现,鸡和小鼠在临床表现上相似,均呈现胃肠炎和贫血症状;而病毒载量和表达量有差异,GyV3在鸡的肾上腺和肾脏中复制表达量较高,而在小鼠的大脑和睾丸中表达量较高。综上所述,GyV3可引起鸡的传染性病毒性腺胃炎和贫血,并且可跨种感染小鼠,引起小鼠的胃肠炎和贫血,但是GyV3感染鸡和鼠的靶器官存在差异。此外,GyV3可在鸡群中水平传播,在鼠群中水平传播。本研究不仅为后续研究GyV3的致病机制明确了方向,而且为GyV3的防控提供科学理论依据,为建立完善的公共卫生防御体系提供参考。
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