重组N-酰基高丝氨酸内酯酶的酶学特性和功能研究

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N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactone,AHLs)作为细菌群体感应中的信号分子参与调节植物病原细菌致病因子的表达。N酰基高丝氨酸内酯酶(N-acylhomoserine lactone lactonase,AHL-Lactonase)通过水解AHL生成酰基高丝氨酸,使AHL失去活性,阻断病原菌的群体感应机制,使病原菌失去致病力。 利用谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析柱和凝血酶处理获得纯化的重组AHL-Lactonase,其分子量约为28KD,其反应的最适pH为8.0,在30℃以下稳定性很高,且它的活性不需要Zn2+或其他金属离子的作用。动力学和底物特异性分析表明,AHL-Lactonase对所检测的三种AHL具有很强的催化活性,催化效率分别为3.35,3.80,4.92(mM-1·s-1),暗示其AHL的底物谱可能较宽,并且具有催化裂解内酯键的特异性。 很多动植物的病原细菌,包括胡萝卜软腐欧文氏菌和铜绿假单胞菌等在侵染动植物有机体的过程中,首先利用细菌的群体感应机制诱导致病因子的表达,在致病因子的作用下侵染宿主。致病性检测表明,重组AHL-Lactonase对胡萝卜软腐病菌具有较强的抗病活性,在致病菌培养基加入AHL-Lactonase培养20h之后,培养基上清之中果胶酶(pectate lyase and prctin lyase,PL)、纤维素酶(cellulase,Cel)和多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)的活性都存在不同程度的减小。
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