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与传统的核酸纯化方法相比,以Fe304磁性复合微球为载体的核酸纯化方法由于其纯化过程不需要离心,避免了交叉污染,提取结果重复性好、稳定性高、操作简单等优点而成为一种非常有前景的纯化方法,目前国内应用于大规模自动化生物分离的磁性微粒产品仍较少。本研究旨在利用水热合成的方法制备四氧化三铁磁性微粒,并将二氧化硅修饰在磁性微粒表面形成磁性复合微球,使其具有良好的磁响应性和化学稳定性,并将磁性复合微球应用于全血基因组DNA纯化,建立了快速、高效、高质量的核酸自动化纯化体系。主要得到了以下结论:(1)利用水热合成的方法制备了Fe304磁性微粒,并以X射线衍射(XRD)、透射电子显微镜镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅立叶红外光谱(FT-IR)、振动样品磁强计(VSM)等分析技术对Fe3O4粒子的物相、微观形貌和磁学性能进行了表征,实验结果表明,制备的Fe304磁性粒子粒度大小在200 nm-300 nm范围内,粒径分布均一、大小可控、分散性好,平均饱和磁化强度为72.6 emu/g,室温下接近于超顺磁性。(2)利用TEOS水解将二氧化硅包覆在Fe304磁粒上,制备了具有良好磁响应性和化学稳定性的SiO2@Fe3O4磁性复合微球。并利用XRD、TEM、FT-IR、VSM等分析技术对复合微球进行了表征,其结果表明:复合粒子表面均匀包覆了无定型SiO2壳层,其结构为核壳结构,复合微球的平均饱和磁化强度为68.8 emu/g。(3)SiO2磁性复合微球在全血基因组DNA纯化上的应用:利用本实验室已建立的核酸纯化试剂体系,以制备的SiO2磁性复合微球为载体,提取全血基因组DNA。经过优化后的DNA纯化体系,换算成每毫升新鲜血液提取的基因组DNA的量平均为29.8μg,经紫外分光光度计检测和琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示DNA的片段大小在22 Kb左右,电泳中所有DNA均呈均一条带,未发生降解,且纯度较高。将优化的体系与开放式的核酸自动化提取工作站相结合,并对自动化提取过程进行了优化,结果显示:应用自动化纯化体系,换算为每毫升新鲜血液平均可以提取38.9μg的基因组DNA,电泳中所有DNA都呈明亮均一的条带,没有发生降解。对磁性复合微球载体批内差和批间差的测试表明,优化体系的批内差和批间差都在5%以内,重复性好,一个纯化周期80 min内可提取96个样本,大大增加了全血基因组DNA提取的效率,从而建立了一种高效、快速、稳定性的核酸纯化体系,为试剂体系用于大规模自动化的核酸提取及后续的实验奠定了基础。