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茶树中的茶多酚如儿茶素、黄酮醇和原花青素化合物的生物合成途径及其涉及的酶类基本已经清晰,但对控制相关酶类的结构基因和调节基因及其功能并未得到有效验证。主要的困难是茶树稳定的转基因体系难以建立,茶树再生体系周期长效率低。提高茶树再生体系的效率、尝试建立茶树瞬时遗传转化体系依然是当前努力的目标。借助模式植物的转基因体系验证茶树相关基因的功能则是另一种选择。本论文在这些方面做了一些探讨,主要结果如下:1、茶树一种再生体系的建立本试验建立了一种以茶树农抗早种子为外植体—胚性愈伤组织诱导—胚性愈伤组织增殖—不定芽诱导—不定芽增殖—体外生根的茶树组培再生体系。该再生体系具有两步增殖阶段,即愈伤组织增殖和不定芽增殖。具体步骤为:采集9月初的茶籽为外植体,经消毒后培养在添加了2,4-D(0.5mg/L)和KT(0.1mg/L)的B5培养基中,2周后有愈伤组织长出,愈伤组织继代培养于该培养基中,可稳定继代4年;将获得的愈伤组织培养于添加了IBA(0.1mg/L)6-BA(2.0mg/L)的MS培养基中,4周后芽的诱导率可以达到65.71%;将诱导出的芽培养于添加IBA(0.1mg/L)和TDZ(0.01mg/L)的MS培养基中,4周后发出大量丛生芽;将丛生芽培养于添加了IBA(0.2mg/L)的MS培养基中进行壮苗;选取5cm以上的粗壮茶苗直接培养于土壤中,5个月后存活率高达80.8%,整个周期约为25周。2、基于茶树愈伤组织为材料的基因瞬时表达体系的研究本研究选用SPSS17.0正交试验软件,对根癌农杆菌EHA105侵染的4个条件(菌液OD值、侵染时间、共培养天数及乙酰丁香酮AS用量)进行优化,试验结果表明,以上述农抗早愈伤组织为材料,以GUS为报告基因,菌液OD值为0.6、侵染时间为30分钟、AS用量为9.8mg/L、共培养天数为5天时,侵染率可以达到34.15%。来自龙井43的愈伤组织侵染率高于农抗早。组织定位分析显示,外源基因可以在茶树愈伤组织中表达,但是表达率随着时间的推移逐步下降。3、利用烟草遗传转化体系验证茶树类黄酮合成相关基因功能对基于除草剂筛选的烟草遗传转化体系是否能验证茶树类黄酮合成相关基因功能进行了研究。试验发现,利用转基因烟草花色的变化可以方便验证茶树类黄酮合成相关基因的功能,但是必须注意野生型烟草花中花青素的含量呈现初开较低,盛开当天达到最高,之后逐渐降低的规律;温度影响野生型烟草花中花青素的合成,温度越高,花色越浅。本研究选择带有目的基因CsANR的根癌农杆菌EHA105侵染烟草G28,经过脱菌、草铵膦除草剂筛选、烟草再生培养,最终获得带有茶树ANR的转基因烟草;并观察发现,与野生型烟草相比较,转CsANR基因烟草的花色明显下降;检测分析表明,转CsANR基因烟草中的花青素含量下降,DMACA显色的原花青素含量明显提高。4、利用拟南芥遗传转化体系验证茶树类黄酮合成相关基因功能本论文首先研究了拟南芥的种植规律。试验发现,拟南芥的种植及其性状受到温度、湿度、光照强度和通风等环境因素的影响较大。试验利用蘸花法,选择带有目的CsANR的农杆菌C58C1侵染拟南芥pap1突变体,利用含草铵膦培养基筛选T0种子,观察T1植株的表型。结果发现,pap1突变体与野生型拟南芥相比,叶片和茎呈现红色,而经带有CsANR的农杆菌侵染后的二叶期pap1,它们的叶片和茎均出现红紫色明显减少的症状,并伴随着花青素含量的降低,但是没有检测到DMACA检测的原花青素增加。