【摘 要】
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目的重组慢病毒介导TGF-β3/BMP-2联合基因转染兔骨髓间充质干细胞诱导其软骨细胞分化,并比较其与TGF-β3单基因转染诱导软骨细胞分化的效率.方法全骨髓贴壁法分离、培养兔骨
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目的重组慢病毒介导TGF-β3/BMP-2联合基因转染兔骨髓间充质干细胞诱导其软骨细胞分化,并比较其与TGF-β3单基因转染诱导软骨细胞分化的效率.方法全骨髓贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞,CCK-8法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/BMP-2联合基因(TB组),转染后培养14天,荧光显微镜下观察各组细胞形态,RT-PCR、Westem blot分别检测SOX-9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量,甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测细胞外基质表达。结果流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07%)、白细胞表面抗原(HLA-DR,1.73％)均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79%)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状,Rr-PCR.Western blot结果均示T组、TB组SOX-9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量均比C组、N组高(P<0.05),且TB组表达量高于T组(P<0.01)。结论TGF-β3/BMP-2联合基因转染骨髓间充质干细胞能诱导其成软骨细胞分化,且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染。
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