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目的:宫颈癌是常见的妇科肿瘤,在世界范围内,它的发生率仅次于乳腺癌,位于第二位,其病死率在女性恶性肿瘤中居首位。大量流行病学和生物学研究表明,高危型人乳头状瘤病毒( human papillomavirus,HPV)持续感染是宫颈癌及其癌前病变发病的主要危险因素,因此,进行HPV感染型别尤其是高危亚型的鉴定对预防和早期发现宫颈癌具有重要意义。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen ,PCNA)是DNA合成必需的细胞周期调节蛋白,是检测肿瘤细胞增殖活性的常用指标。诱导型一氧化氮合酶(inducible ni-tric oxide synthase,iNOs)是一种非钙离子依赖性酶,它可以被细菌毒素(LPS)及炎性介质等诱导而产生一氧化氮( nitric oxide,NO)。本实验以免疫组化方法及组织流式方法检测了HPV16-E6蛋白、PCNA、iNOs在正常宫颈组织、宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变(CIN)、宫颈癌各组中的表达情况及三者的相关性,以及三者与众多临床病理参数之间的关系,以探讨三者在宫颈癌发生发展及侵袭转移中的作用及相互关系。方法:本研究标本取自河北医科大学第四医院2006年1月-2007年6月间就诊于妇科、初诊的宫颈癌患者52例,术后均经病理确诊,病历资料完整。其中鳞癌40例,腺癌9例,腺鳞癌及透明细胞癌3例。根据国际妇产科联盟(FIGO,2000)标准分期:Ⅰ期25例,Ⅱ～Ⅲ期27例。选择同期因妇科良性疾病手术治疗或门诊治疗患者的正常宫颈组织25例,宫颈炎症43例, CIN25例。病历资料完整。所有标本于离体半小时内取材,以10%中性甲醛及70%酒精固定,应用免疫组化S-P法及组织流式法检测HPV16-E6蛋白、PCNA及iNOs在不同宫颈病变组织中的表达情况及其与宫颈癌临床病理特征之间的关系,分析二者之间的相关性。应用SPSS13.0统计软件包处理数据,采用x2检验、确切概率法、Spea-rman等级相关法、方差齐性检验、LSD检验进行统计分析。结果:1、HPV-E6蛋白在宫颈组织中的表达与临床病理特征的关系:HPV-E6在宫颈癌组,CIN组,宫颈炎组及正常宫颈组的阳性率分表达逐渐降低,分别为90.38%、60.00%、25.58%、0%,四组比较差异显著(P<0.05)。HPV-E6在年龄<45岁组与≥45岁组中的阳性表达率为92.59%,88.00%,两者差异不显著(P>0.05);在鳞癌组及非鳞癌组中阳性率为97.50%、66.67%、两者差异显著(P<0.05);在Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组中阳性表达率为84.85%、89.47%,三者差异不显著(P>0.05);临床分期中,Ⅰ期组、Ⅱ～Ⅲ期组阳性率为88.00%、92.59%,两者差异不显著(P>0.05);有淋巴结转移组和无淋巴结转移组阳性率为90.00%、90.63%,两者无显著性差异(P>0.05);肿瘤直径<4cm和≥4cm阳性率为91.18%、88.89%,两者差异不显著(P>0.05);有宫旁或脉管浸润与无宫旁或脉管浸润的组织中为95.00%、87.50%,两者差异不显著(P>0.05);浸润浅肌层组和浸润深肌层组阳性率为87.10%、95.24%,两者差异不显著(P>0.05)。2、PCNA在宫颈组织中的表达与临床病理特征的关系:PCNA在宫颈癌组,CIN组,宫颈炎组及正常宫颈组的阳性率分表达逐渐降低,分别为86.54%、56.00%、23.26%、0%,四组比较差异显著(P<0.05)。PCNA在年龄<45岁组与≥45岁组中的阳性表达率为85.19%,88.00%,两者比较差异不显著(P>0.05);在鳞癌组,腺癌组及其他病理类型组中阳性率为90.00%、77.78%、66.67%,三者相比差异不显著(P>0.05);在Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组中阳性表达率为78.79%、100%,两者比较差异显著(P<0.05);不同临床分期中,Ⅰ期组、Ⅱ～Ⅲ期组阳性率为72.00%、100%,两者比较差异显著(P<0.05);有淋巴结转移组和无淋巴结转移组阳性率为100.0%、78.13%,两者差异显著(P<0.05);肿瘤直径<4cm组和≥4cm组阳性率为85.29%、88.89%,两者差异不显著(P>0.05);有宫旁或脉管浸润与无宫旁或脉管浸润组阳性率为100.0%、78.13%,两者差异显著(P<0.05);浸润浅肌层组和浸润深肌层组阳性率为77.42%、100.0%,两者差异显著(P<0.05)。3 iNOs在宫颈组织中的表达与临床病理特征的关系:iNOs在宫颈癌组,CIN组,宫颈炎组及正常宫颈组的阳性率分表达逐渐降低,分别为88.46%、60.00%、27.91%、0%,四组比较差异显著(P<0.05)。iNOs在年龄<45岁组与≥45岁组中的阳性表达率为88.89%,88.00%,两者差异不显著(P>0.05);在鳞癌组,腺癌组及其他病理类型组中阳性率为90.00%、77.78%、100.0%,三者差异不显著(P>0.05);在Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组中阳性表达率为87.88%、89.47%,两者比较差异不显著(P>0.05);不同临床分期中,Ⅰ期组、Ⅱ～Ⅲ期组阳性率为76.00%、100%,两者比较差异显著(P<0.05);有淋巴结转移组和无淋巴结转移组阳性率为100.00%、81.82%,两者差异显著(P<0.05);肿瘤直径<4cm组和≥4cm组阳性率为85.29%、94.44%,两者差异不显著(P>0.05);有宫旁或脉管浸润与无宫旁或脉管浸润组阳性率为100.00%、81.82%,两者差异显著(P<0.05);浸润浅肌层组和浸润深肌层组阳性率为80.65%、100%,两者差异显著(P<0.05)。4 HPV-E6蛋白、PCNA及iNOs三者之间相关性:Spe-arman等级相关分析显示,在宫颈癌组,HPV-E6蛋白与PCNA表达强度存在正相关关系(rs=0.636, P<0.01),HPV-E6蛋白与iNOs表达强度存在正相关关系(rs=0.701, P<0.01), PCNA与iNOs表达亦呈正相关关系(rs=0.755, P<0.01)。5组织流式结果:HPV-E6蛋白在正常宫颈、宫颈炎、CIN、宫颈癌中FI值分别为0.97±0.03、1.11±0.06、1.29±0.04、1.52±0.06,四组比较差异显著(P<0.05);PCNA在正常宫颈、宫颈炎、CIN、宫颈癌中FI值分别为0.95±0.04、1.06±0.04、1.27±0.05、1.55±0.04,四组比较差异显著(P<0.05);iNOs在正常宫颈、宫颈炎、CIN、宫颈癌中FI值分别为0.96±0.04、1.10±0.06、1.42±0.08、1.84±0.09,四组比较差异显著(P<0.05)。结论:1 HPV-E6蛋白在正常宫颈、宫颈炎、CIN及宫颈癌中阳性表达率逐渐上升,且两两比较差异显著,显示HPV16-E6与宫颈癌及其癌前病变的发生、发展密切相关, HPV感染是宫颈病变发生的早期事件。HPV16-E6蛋白表达与患者年龄、临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结有无转移、肿瘤直径、浸润深度及宫旁或脉管浸润均无明显相关,而与病理类型关系密切。2 PCNA在宫颈癌及CIN组中阳性率明显高于宫颈炎及正常宫颈组,差异显著,显示PCNA蛋白高表达可能促使宫颈鳞状上皮细胞过度增生并恶性转化,PCNA蛋白的异常表达是宫颈癌发生的早期事件。本研究显示在宫颈癌中PCNA阳性表达率与患者年龄、病理类型、肿瘤直径无明显相关,而与组织学分级、临床分期、淋巴结转移、宫旁或脉管有无浸润以及浸润深度显著相关,提示PCNA蛋白表达升高可能与宫颈癌的进展、转移有关。3 iNOs在宫颈癌中高表达可以认为iNOs在宫颈癌的发生、发展中起重要作用。本研究结果显示iNOs的表达与宫颈癌患者年龄、组织的大小、组织类型上、组织学分级无显著相关,而与临床分期、淋巴结转移、宫旁或脉管有无浸润及侵润深度关系密切,显示iNOs的表达与宫颈癌的侵袭生长潜能密切相关。4在宫颈癌组HPV-E6蛋白、PCNA及iNOs两两比较均呈正相关,证实了HPV-E6蛋白、PCNA及iNOs与宫颈癌的发生、发展密切相关,且相互之间均具有协同作用。