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研究背景神经再生一直以来都是神经科学研究的重点和难点。神经再生是指特定条件下神经元轴突再生，包括轴突出芽，生长和延伸，与靶细胞重建突触关系，实现神经支配，恢复功能。低等脊髓动物如鱼类及两栖动物的中枢神经和周围神经都能够再生，而哺乳动物只有周围神经可以再生，中枢神经系统损伤后则无有效再生（Cajal1928）。视网膜是中枢神经系统的外延，且由于视网膜的视神经节细胞（retinalganglioncells,RGCs）的轴突集中成视神经（opticnerve,ON），易于操作，便于对RGCs的再生进行定量分析，所以视网膜及视神经广泛运用于中枢神经系统再生的研究。影响视神经再生的因素包括：视网膜节细胞自身的再生潜力、周围的抑制因素和促进因素的影响。视网膜神经节细胞的再生主要围绕这三个方面来实现，上调促进基因来重新启动自身潜力，去除抑制因子的影响，清除瘢痕，增加神经营养因子来促进再生。目前研究表明，神经营养因子和钙通道阻滞剂等对视神经损伤后视网膜节细胞的存活和再生有促进作用。中药对促进视网膜节细胞存活以及对中枢神经系统神经元存活和再生的研究具有重要意义。黄芪甲苷(astragalosideIVAST)是中药黄芪的主要有效成分之一，是一种Ca2+内流拮抗剂，具有舒张血管、抑制自由基生成、清除自由基、抗炎、抗氧化等作用。本实验拟研究腹腔注射AST对轴突损伤后RGCs存活和再生的影响。第一部分黄芪甲苷对视网膜节细胞存活的影响目的研究黄芪甲苷对视神经损伤后视网膜节细胞存活的影响。方法选用SD大鼠，体重200～250g，动物随机分组：正常组（n=5）、单纯视神经切断组、视神经切断后AST处理组和生理盐水处理的对照组，后三组又分为5、7、14d组（n=5）。量效关系组分4个AST剂量组10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg组（n=5）。荧光金(fluorogold,FG)逆行标记：正常对照组：上丘和外侧膝状体注射1.5ulFG逆行标记RGCs，并且于左眼眶内暴露视神经，分层缝合，5d后取材。视神经损伤模型操作：损伤各组：经FG逆行标记RGCs5d后的大鼠，在手术显微镜下眶内暴露视神经，在球后2mm处切断视神经，分层缝合，于各时间点取材。视网膜铺片和计数：各观察时间点，处死大鼠取出眼球，固定后剥离视网膜分鼻上、鼻下、颞上、颞下四部分铺片，在荧光显微镜下，距视盘0.5、1.5、2.5mm处各拍摄200×的荧光照片各3张。用image-pro6.0软件对照片上标记的RGCs进行计数，求平均值，4个部分RGCs数量累加转化成单位面积RGCs密度。结果经黄芪甲苷处理的动物，切断视神经5、7、14d后的存活节细胞的平均密度为（1359±193）/mm2，（1046±175）/mm2和（514±67）/mm2，与正常视网膜节细胞密度相比，其存活率分别为60.94%、46.90%和23.04%。5、7d、14d组的节细胞存活率增加了9.59%、11.27%、11.32%。经方差分析，黄芪甲苷处理组与视神经切断组和生理盐水对照组相比在视神经切断后不同时间段其P值均小于0.05，表明它们存在显著性差异。结论黄芪甲苷对视神经损伤后视网膜节细胞存活有促进作用。第二部分黄芪甲苷对视网膜节细胞再生的影响目的研究黄芪甲苷对视网膜节细胞再生的影响。方法选用SD大鼠，体重200～250g，动物随机分组：生理盐水对照组、AST处理组（各组又分为21、28d组）以及量效关系组（21d）n=5。视神经再生模型操作：动物麻醉后手术显微镜下眶内暴露视神经，距球后1mm切断视神经，移植一段2cm自体坐骨神经，取材前3d修剪移植的自体坐骨神经为1.5cm并放置FG逆行标记再生的视网膜节细胞，于21、28d取材。视网膜铺片的RGCs计数同前。结果经黄芪甲苷处理组，术后3、4周再生视网膜节细胞平均密度为（978±99）/mm2和（546±61）/mm2，与生理盐水对照组相比较，t检验，存在显著性差异(p<0.05)。结论黄芪甲苷对视神经损伤后视网膜节细胞再生有促进作用。