当细胞DNA发生损伤时，多种修复机制会启动进行损伤DNA的修复，其中同源重组(Homologous Recombination，HR)修复是较为精确的修复机制，在DNA双链断裂及停滞复制叉的修复中发挥着重要的作用。该修复途径中最关键的步骤之一是对重组中间体HJ(Holliday Junction)的处理，该过程可以通过解离酶进行。几种硫化叶菌如硫化叶菌硫磺矿硫化叶菌Sulfolobus solfataricus和冰岛硫化叶菌Sulfolobusislandicus中已经鉴定了两个解离酶:Hje和Hjc。其中Hjc在整个古菌中都是保守的，而Hje只在泉古菌中存在。　　本实验室的前期研究发现，SDS-PAGE胶上显示古菌中表达和纯化得到的不加标签的Hje大小和大肠杆菌中纯化的Hje大小类似，而古菌中表达和纯化得到的Hje-C-His比大肠杆菌中表达和纯化的Hje-C-His要大2 kDa左右。真核生物中的解离酶通过翻译后修饰调控其功能，如Gen1、Yen1存在磷酸化与去磷酸化修饰，这种修饰会对解离酶的活性、在细胞中的定位或者是蛋白的大小造成影响。实验室先前对Hje-C-His过表达菌株的microarray分析发现，过表达Hje-C-His菌株中编码丝氨酸/苏氨酸的蛋白激酶SiRe_2056转录水平上升了3.25倍。综合这几点，我们推测古菌中解离酶Hje也可能存在这种修饰。　　我们还发现，过表达Hje-C-His菌株生长明显受到抑制。Hje的C末端可能存在两个磷酸化位点:127位丝氨酸(S127)和134位苏氨酸(TTM)。首先，以E233S菌株为材料，构建该两位点突变成丙氨酸(A)和谷氨酸(E)的Hje突变体过表达菌株，并对Hje突变体蛋白的大小和突变体过表达菌株的生长进行测定。发现两位点突变成丙氨酸，突变体蛋白不再变大，并且过表达菌株的生长不受抑制，恢复正常;将两位点突变成谷氨酸，模拟体内磷酸化修饰，过表达菌株Sis/pSeSD-HjeT134E-C-His、Sis/pSeSD-HjeT134E-no-His的生长仍受抑制，而Sis/pSeSD-HjeS127E-C-His、Sis/ pSeSD-HjeS127E-no-His的生长却恢复正常不受抑制。体外生化实验证明除了HjeS127E-C-His活性有略微下降外，其它突变体的核酸酶活性没有变化。这间接证明T134位点很有可能是磷酸化修饰调控位点，对该位点的修饰可以调控核酸酶的活性。而S127也是一个重要的位点，也许与蛋白与蛋白的互作相关。　　接下来，为了排除C端标签的添加可能对S127、T134的影响，构建N端加标签的菌株Sis/pSeSD-Hje-N-His，检测蛋白大小和菌株生长，发现Hje-N-His的大小为16 kDa，和不加标签的Hje大小类似，过表达菌株的生长也不受抑制。磷酸酶处理Hje-N-His蛋白后，Western验证发现蛋白大小不变。对真核生物中解离酶研究发现，该酶的翻译后修饰仅存在与特定的细胞周期中，以此类推，古菌中解离酶Hje的修饰也许仅存在于特定的周期中。所以我们推测体内Hje-N-His的磷酸化水平低于Hje-C-His。　　真核生物中解离酶的翻译后修饰存在于特定的细胞周期中，对解离酶的翻译后修饰研究采用细胞同步化处理的方式。而古菌中很难进行细胞同步化，所以我们纯化出的Hje-N-His中处于修饰状态的蛋白比例很低，故用磷酸酶处理后蛋白大小不会变化。　　为了获得更多的修饰状态的蛋白用来进行质谱鉴定，参考真核生物中研究方法用损伤剂MMS处理细胞。发现MMS处理后，Western可以检测到两种不同大小的Hje信号，所以我们推测Hje可能存在受MMS诱导的翻译后修饰，这种修饰影响蛋白大小。为了验证Hje的修饰类型和寻找Hje的互作蛋白，尝试通过免疫共沉淀的方法富集本底修饰状态的Hje。但是由于Hje本底水平含量太低，我们无法富集到高纯度的Hje。免疫共沉淀的方法仍然需要进行一些改进来获得修饰状态的Hje以进行质谱鉴定。