论文部分内容阅读
目的:1研究CXC趋化因子10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)干预前后,小鼠胰岛素瘤细胞系βTc6细胞TLR4/NF-κB的表达情况及相应的细胞形态、细胞增殖能力以及细胞凋亡情况的变化。2应用吡格列酮干预CXCL10对胰岛β细胞的作用,观察吡格列酮干预后上述研究指标的改变,探讨吡格列酮对CXCL10作用下的胰岛β细胞的影响。方法:1体外培养βTc6细胞,不同浓度CXCL10(0.1ng/ml、1.0ng/ml、10.0ng/ml)分别孵育细胞不同时限(30分钟～48小时)后,应用RT-PCR和Western Blot检测TLR4和NF-κB表达活化情况,CCK-8法检测βTc6细胞的增殖能力,流式细胞仪和DNA LADDER检测细胞凋亡情况。2不同浓度吡格列酮(0.1umol/L、1.0umol/L、10.0umol/L)预孵育βTc6细胞24小时后,再予10.0ng/ml CXCL10共同孵育细胞不同时限(30分钟～48小时)后,应用RT-PCR和Western Blot检测TLR4和NF-κB表达活化情况,CCK-8法检测βTc6细胞的增殖能力,流式细胞仪和DNA LADDER检测细胞凋亡情况。结果:1经过CXCL10 0.1ng/ml～1.0ng/ml干预12～48小时之后,βTc6细胞形态未见明显变化,但10.0ng/ml CXCL10干预组在干预24～48小时之后,βTc6细胞生长变稀疏,出现脱壁漂浮的细胞,并且细胞增殖活力降低。2经0.1～1.0ng/ml CXCL10干预12小时后,βTc6细胞TLR4 mRNA及蛋白的表达无明显变化,但10.0ng/ml CXCL10干预组TLR4 mRNA及蛋白的表达已有上升。随着干预时间延长至24小时,1.0ng/ml CXCL10干预组βTc6细胞TLR4 mRNA及蛋白的表达亦高于空白对照组。干预时间进一步延长至48小时,1.0～10.0ng/mlCXCL10干预组TLR4 mRNA及蛋白的表达进一步上调。CXCL10对TLR4表达的上调具有浓度及时间依赖性。3经1.0～10.0ng/ml CXCL10干预30分钟后,βTc6细胞NF-κB的活化水平明显上调。随着时间延长至24小时,0.1～10.0ng/ml CXCL10干预组细胞NF-κB的活化水平逐渐下调。而10.0ng/ml CXCL10干预组,βTc6细胞的NF-κB活化持续到24小时。干预时间进一步延长至48小时,0.1～10.0ng/ml CXCL10干预组βTc6细胞NF-κB的活化水平接近于空白对照组。CXCL10对NF-κB活化具有浓度及时间依赖性。4经0.1～10.0ng/ml CXCL10干预12～24小时后,流式细胞术及DNA LADDER显示10.0ng/ml CXCL10干预βTc6细胞24小时后出现细胞凋亡。随着时间延长至48小时,1.0ng/ml CXCL10干预组亦出现细胞凋亡。5吡格列酮干预对CXCL10作用下βTc6细胞TLR4/NF-κB信号通路及相应细胞凋亡情况的影响:(1)1.0umol/L～10.0umol/L吡格列酮预孵育βTc6细胞24小时后可抵抗CXCL10诱导的细胞凋亡并上调了细胞的增殖活力。而0.1umol/L吡格列酮干预组无明显变化。(2)1.0umol/L～10.0umol/L吡格列酮预孵育βTc6细胞24小时后,吡格列酮下调了CXCL10诱导的细胞TLR4/NF-κB活化。而0.1umol/L吡格列酮干预组尚不能改变CXCL10诱导的细胞TLR4/NF-κB信号的传导。结论:1短时间一定浓度的CXCL10作用可促进βTc6细胞内NF-κB的活化,但对细胞内TLR4 mRNA及蛋白的表达无影响,亦对细胞的增殖活性以及凋亡无显著影响。2长时间高浓度的CXCL10作用将导致TLR4 mRNA及蛋白的表达显著上调,使β细胞的增殖活性受损并诱导β细胞凋亡。3适宜浓度的吡格列酮干预一定的时限后可以下调CXCL10对β细胞内TLR4表达及NF-κB活化的影响,并明显改善细胞的增殖能力,拮抗CXCL10诱导的β细胞凋亡。