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第一部分 以P-糖蛋白和SORCIN为靶点：二氢杨梅素通过增加阿霉素细胞毒性逆转MCF-7/ADR与K562/ADR多药耐药 目的： 本研究目的是探讨二氢杨梅素是否能够逆转MCF7/ADR与K562/ADR多药耐药以及其可能的逆转机制。 方法： （1）用CCK-8 实验检测药物的细胞毒性； （2）荧光酶标仪检测阿霉素胞内蓄积； （3）流式细胞术检测罗丹明-123、胞内游离Ca2+、活性氧水平； （4）运用western blotting及RT-qPCR检测P-gp、SORCIN、ERK及凋亡相关蛋白表达； （5）通过RNAi技术基因沉默SORCIN考察阿霉素的细胞毒性； （6）FITC-Annexin V/7-AAD染色及Hoechst33342 染色检测细胞凋亡； （7）试剂盒检测caspase-3 活性、ATP及ATPase水平； （8）荷瘤小鼠实验检测二氢杨梅素对阿霉素毒性作用的影响。 结果： 二氢杨梅素剂量依赖地增强阿霉素对MCF7/ADR和K562/ADR的细胞毒性作用。二氢杨梅素可以增加耐药株中阿霉素与罗丹明-123 的胞内蓄积，对敏感株细胞无影响。二氢杨梅素通过降低磷酸化ERK的表达下调P-gp蛋白与mRNA的表达。SORCIN参与肿瘤耐药的形成，其表达可以被二氢杨梅素抑制。二氢杨梅素抑制SORCIN的表达，进而增加细胞内游离钙离子含量，合用阿霉素后增加细胞的凋亡，引起凋亡相关信号通路蛋白改变。 结论： （1）二氢杨梅素可以增强阿霉素抗肿瘤效果，发挥逆转MCF7/ADR与K562/ADR肿瘤多药耐药作用； （2）其机制一是：二氢杨梅素通过阻断MAPK/ERK通路下调P-gp的表达，增加底物的胞内蓄积； （3）机制二是：二氢杨梅素可以减少SORCIN表达，增加细胞内游离钙离子含量，进一步通过内质网、线粒体及p53途径增强阿霉素引起的细胞凋亡。 第二部分 二氢杨梅素与昂丹司琼合用通过降低K562/ADR细胞中SORCIN表达增强阿霉素抗肿瘤效果 目的： 本研究目的是探讨二氢杨梅素与昂丹司琼合用否能够逆转K562/ADR多药耐药以及其可能的逆转机制，及揭示SORCIN与P-gp之间的内在关系。 方法： （1）采用CCK-8实验检测药物的细胞毒性； （2）荧光酶标仪检测阿霉素胞内蓄积； （3）流式细胞术检测罗丹明-123蓄积水平； （4）运用western blot及qPCR检测P-gp、SORCIN、ERK1/2、Akt及凋亡、周期相关蛋白表达； （5）通过RNAi技术沉默SORCIN后考察阿霉素的细胞毒性； （6）FITC-Annexin V/ 7-AAD双色荧光染色、Hoechst33342染色、caspase-3活性测定试剂盒检测细胞凋亡； （7）流式细胞仪检测PI染色后的细胞周期。 结果： 二氢杨梅素与昂丹司琼合用显著提高阿霉素与罗丹明-123在K562/ADR细胞株中的蓄积，从而显著提高阿霉素的抗增殖作用。二氢杨梅素通过ERK/Akt信号通路下调P-gp表达，而昂丹司琼不能调节P-gp表达。SORCIN参与K562/ADR耐药性，同时SORCIN的表达可以被二氢杨梅素抑制而不是昂丹司琼。SORCIN通过抑制ERK/Akt信号通路降低P-gp在K562/ADR细胞中的表达。二氢杨梅素与昂丹司琼合用通过细胞G2/M周期阻滞、增加细胞凋亡发挥逆转阿霉素耐药作用。 结论： SORCIN可以通过ERK/Akt信号通路抑制P-gp表达。二氢杨梅素与昂丹司琼合用可以增强阿霉素抗肿瘤效果，逆转K562/ADR肿瘤多药耐药，且优于单独应用。二氢杨梅素通过抑制SORCIN/ERK/Akt进而抑制P-gp表达，而昂丹司琼不能抑制P-gp的表达。二氢杨梅素与昂丹司琼合用通过细胞G2/M周期阻滞、增加细胞凋亡发挥逆转阿霉素耐药作用。