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该研究从土壤中分离筛选到一株产热稳定SOX的优良菌株BSD-8,对其进行了系统鉴定,并进一步研究了菌株的产酶发酵条件、酶的纯化方法及酶的性质,又通过染色体步移的方法克隆到该酶的全基因.试验结果如下:1.菌株的分离筛选及鉴定:经过富集培养和划线分离纯化,得到5株产SOX的菌,分别为菌株HZ-6、HZ-5、HZ-13、BSD-2、BSD-8.通过酶活性及酶热稳定性测定,确定菌株BSD-8为最优产SOX菌株.菌株BSD-8的形态学观察、生理生化特征及16S rDNA序列比对结果表明该菌为一株芽孢杆菌(Bacillus sp.).2.菌株产酶条件:针对影响产酶的各个条件,采用摇瓶培养试验,以测定生长量和酶活性为指标,确定了菌株BSD-8的最适产酶条件为:肌酸,10g;酵母膏,8g;K<,2>HPO<,4>·3H<,2>O,2g;KH<,2>PO<,4>,0.5g;MgSO<,4>·7H<,2>O,0.5g;NaCl,3g;H<,2>O,1000mL;pH 6.5;培养温度35℃,100mL三角瓶装40mL培养基,于120rpm转速下培养18h~24h.3.酶的提取:SOX经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Toyopearl HW-65C疏水层析、Sephadex G-75分子筛层析后,提纯了25倍,比活力达5.3U/mg.经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量为51000Da.4.酶的性质:酶反应的最适pH为8.0,其最适作用温度为60℃;在pH7.0~10.0、60℃以下稳定.与已报道的SOX相比,该酶的热稳定性更好.对肌氨酸的Km值为3.1mmol/L,转化数Kcat为4.5/s.Ag<+>、Hg<2+>、SDS能使该酶几乎完全失活,Zn<2+>、Fe<3+>、Li<+>、Cr<3+>、Cu<2+>和NaN<,3>对酶活性几乎没有影响.表面活性剂Tween 20和TritonX-100对酶活性没有影响,而Tween80对酶有明显的抑制作用.该酶与黄素以非共价键结合.5.酶的基因克隆及序列分析:运用染色体步移的方法,经PCR扩增得到BSD-8菌株SOX基因(sox)的全序列,该基因的全长为1164bp,编码387个氨基酸.序列比对结果表明该酶的氨基酸序列与已知的其它SOX有明显差异.