论文部分内容阅读
肿瘤转移是晚期结肠癌患者死亡的主要原因之一,也是结肠癌临床治疗的难题,然而其具体机制尚不明确。我们前期研究发现KIAA1199高表达是影响结肠癌转移和预后不良的因素之一,且该蛋白具有促进结肠癌细胞转移的功能,但其作用机制尚不清楚。在本研究中,我们通过构建小鼠原位瘤模型,发现敲低KIAA1199可抑制小鼠原位结肠癌发生器官转移,进一步验证了 KIAA1199促进结肠癌细胞转移的功能。为了探索KIAA1199促进结肠癌转移的作用机制,我们通过免疫共沉淀(IP:KIAA1199)和质谱分析检测发现KIAA1199与蛋白磷酸酶PP2A相结合。PP2A是细胞中主要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,可调控细胞信号通路中的关键蛋白分子脱磷酸化,从而调节细胞周期、细胞迁移及细胞存活等生物学行为。我们通过Pulldown实验和磷酸酶活性检测,发现KIAA1199通过其C-末端与PP2A结合,增强PP2A磷酸酶活性;而且发现PP2A抑制剂可抑制KIAA1199/PP2A复合物的磷酸酶活性,也可抑制KIAA1199促进结肠癌细胞侵袭迁移的能力。另外,我们还通过免疫共沉淀实验(IP:PP2A Cα)发现Stathmin是KIAA1199/PP2A复合物的下游底物。Stathmin是一种微管相关蛋白,以磷酸化与非磷酸化形式存在于细胞中;该蛋白在多种肿瘤中高表达,并与肿瘤转移及预后不良相关。本研究发现过表达KIAA1199可降低磷酸化Stathmin蛋白表达,并调节其亚细胞再分布;临床资料分析显示在结肠癌组织中KIAA1199与磷酸化Stathmin蛋白(Ser-16)的表达呈负相关;并且敲低Stathmin表达可抑制KIAA1199促进结肠癌细胞侵袭迁移的能力。这些研究表明PP2A/Stathmin途径在KIAA1199促进结肠癌转移过程中起关键作用。微管由α/β-tubulin异二聚体构成,据报道非磷酸化Stathmin可与tubulin异二聚体结合,阻止微管聚合,导致微管失稳。在本研究中,我们发现过表达KIAA1199可降低乙酰化tubulin蛋白表达,导致微管失稳;并且证实紫杉醇(促微管稳定性化疗药)可抑制KIAA1199促进结肠癌细胞体外侵袭迁移和体内转移的功能。综上所述,本研究首次阐明KIAA1199通过PP2A/Stathmin途径介导微管失稳促进结肠癌细胞转移的作用机制,并揭示紫杉醇对KIAA1199促进结肠癌转移功能的抑制作用。因此,KIAA1199有可能成为预测结肠癌转移的生物标记物和结肠癌治疗的新靶点,以期为结肠癌转移的研究和临床治疗提供新的理论依据。