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邻苯二甲酸丁基苄酯(简称BBP)作为较高级的增塑剂、添加剂和软化剂,广泛用于塑料包装、润滑剂、装饰材料、医药等行业。BBP来源广泛,并且具有难降解等特性,已经成为备受关注的全球性环境污染物之一,有“第二个全球性PCB(多氯联苯类)污染物”之称。研究报道BBP对生物体具有较强的富集作用,并且具有睾丸毒性、胚胎毒性和致畸性,可引发血清中睾酮减少、促卵激素的增加及子宫增大,并改变性别分化；此外,它能引起过敏症及哮喘,对人的神经系统也有影响。因此探讨其对生物体产生的毒理效应的机制具有重要意义。本实验用静态鱼类急性试验方法研究BBP对斑马鱼的毒性效应。结果表明,BBP对斑马鱼96h-LCso为3.98 mg·L-1。在此基础上,设置4个浓度梯度：0、0.332、0.665、1.33 mg·L-1,研究了在不同时间(7、14、21、28d)暴露下,BBP对斑马鱼超氧化物歧化酶(SOD)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。实验期间(0-28d),AChE活性基本呈现下降趋势；SOD活性呈现低浓度刺激、高浓度抑制效应,在14d时,各处理组SOD活性达到最高水平(分别为13.51,14.72,11.81,10.19 U/mg)；CAT活性,除0.665 mg·L-1浓度组在第7d时,呈现出极显著抑制作用(p<0.01)外,其余各处理组CAT活性与对照接近,均无显著差异。本实验从基因转录水平分析了BBP对斑马鱼的毒性,采用半定量RT-PCR技术检测了不同浓度BBP(0、0.332、0.665、1.33 mg·L-1)暴露7d下斑马鱼脑组织和肌肉组织AChE、SOD及CYP1A基因转录量的变化。结果显示,在斑马鱼脑及肌肉组织,AChE基因的相对转录量随着暴露浓度的升高均呈现下降趋势,这与酶活性测定的结果一致；在斑马鱼脑组织中,SOD基因的相对转录量随着浓度的升高首先呈现出下降趋势,但在1.330 mg·L-1浓度组逐步回升。在斑马鱼肌肉组织中,SOD基因的相对转录量随着浓度的升高整体呈现抑制作用,抑制率分别为19.33%,17.86%,17.23%；斑马鱼脑组织CYPIA基因的相对转录量呈现先上升后下降的趋势,在肌肉组织中CYPIA基因相对转录量呈现先下降后上升的趋势。本实验采用基因工程技术成功克隆了斑马鱼脑组织乙酰胆碱酯酶(AChE)基因的cDNA序列,序列全长1905bp,并将其亚克隆到原核表达载体,构建了重组表达质粒,转化到E.coli BL21进行诱导表达,SDS-PAGE结果表明诱导后在69kDa出现特异的蛋白质条带,与斑马鱼AChE蛋白大小一致。