论文部分内容阅读
目前冠心病治疗方法主要有药物治疗、心脏搭桥手术和介入治疗三大类,介入治疗由于操作简单、创伤小、见效快等优势,已成为治疗冠心病的一种最重要的手段,其中冠状动脉血管支架植入术是冠心病介入治疗中最有效的技术之一。然而支架置入过程中会导致血管内皮的损伤,形成血栓并产生再狭窄。研究发现,加速血管支架快速再内皮化会抑制再狭窄和晚期血栓的发生。因此通过捕获内皮祖细胞(EPCs),归巢至血管损伤内皮部位是目前生理性修复血管内皮损伤的有效调控手段。目前捕获EPCs的手段中,磁性纳米粒子正在受到关注。本课题利用没食子酸(GA)修饰Fe304并结合CD34抗体,获得具有良好磁响应性和特异性识别EPCs的磁性纳米粒子(MNP@GA-CD34);傅里叶红外光谱(FT-IR)、X射线光电子能谱(XPS)和透射电子显微镜(TEM)结果表明GA和CD34抗体对Fe304的成功修饰。粒径分析(DLS)、场发射扫描电子显微镜(SEM)和振动样品测磁仪(VSM)分别表征修饰前后纳米粒子的水合粒径,形貌以及磁饱和强度。DLS结果显示裸Fe304纳米粒子粒径比修饰过的纳米粒子大,这是由于表而活性剂GA的分散作用;SEM的结果也显示Fe304纳米粒子团聚严重,而且粒径较大,而MNP@GA与MNP@GA-CD34颗粒轮廓清晰,粒径减小。因为难以保证抗体与纳米粒子的一一结合,所以MNP@GA-CD34没有MNP@GA分散均一,粒径也偏大。VSM结果显示三种样品的饱和磁化强度呈逐渐降低趋势。其次评价上述生物功能化的磁性纳米粒子对体外诱导成功的EPCs的粘附,增殖和凋亡的影响以及标记效果;结果表明:五组浓度为12、24、48、96、120μg/ml的MNP@GA-CD34标记细胞时多结合在细胞膜表面。细胞的标记效果呈现低浓度细胞铺展良好,且当浓度升高,细胞出现脱落。增殖和粘附结果表明当MNP@GA-CD34浓度高于24μg/ml时,显著抑制细胞正常增殖和粘附,而且24μg/ml的MNP@GA-CD34细胞组未出现明显的凋亡现象。因此筛选出做磁场捕获的MNP@GA-CD34最适浓度是24μg/ml。研究外加磁场短期和长期作用下,MNP@GA-CD34将EPCs富集于磁靶向部位的效果。结果显示MNP@GA-CD34组的细胞数目比MNP@GA组和对照组多,而且长期施加磁场捕获的数量也比短期显著增加。在蠕动泵循环体系中,结合支架比较有无外加磁场时MNP@GA-CD34对细胞的捕获情况:磁场组的支架表面比无磁场组粘附的细胞数量多。初步表明,MNP@GA-CD34对EPCs有捕获效果。