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沙门氏菌和金黄色葡萄球菌是两大食源性致病菌。在我国由沙门氏菌和金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件主要因食入了受污染的畜禽肉类食品为主。了解这两类食源性致病菌在畜禽肉类食品中的污染程度，获得其污染的定量数据，可为开展食品安全风险评估提供重要的科学依据。本研究旨在建立可快速、有效检测沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的活菌定量检测方法，并初步应用于畜禽肉类食品中此类菌检测，为食品安全快速定量检测提供技术支持。叠氮丙啶（PMA）作为一种与核酸具有亲和性的光敏性染料，具有活/死细胞筛选的功能。它可通过死亡细胞的细胞膜，进入细胞内，对胞内的DNA进行不可逆修饰，使其不能进行扩增；而活细胞由于细胞膜完全阻止了PMA进入胞内，因此活细胞的DNA扩增不受影响。PMA的选择性功能与菌属不同有关。本研究分别选取了革兰氏阴性菌（沙门氏菌）和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）各一株，分别分析了PMA对两种菌活/死细胞的选择性作用。对PMA作用的几个关键因素，包括曝光时间、最小抑制浓度、最大毒性浓度等进行了探索。通过实验分析，确定5分钟为适宜的曝光时间；沙门氏菌在PMA15μg/ml浓度下可完全抑制死菌DNA扩增，大于40μg/ml浓度时可对活菌产生影响；金黄色葡萄球菌PMA的最小抑制浓度为30μg/ml，最大毒性浓度为50μg/ml。本研究将PMA与qPCR相结合，建立PMA-qPCR定量检测方法，更好地发挥了qPCR快速定量的功能，且利用PMA对活/死细胞具有选择性的特性，规避常规qPCR方法和培养计数法中出现假阳性和漏检的情况，开发快速准确的活菌定量检测技术。通过灵敏度和特异性分析评估PMA-qPCR方法的可靠性。PMA-qPCR方法最低可检出101CFU/ml沙门氏菌或金黄色葡萄球菌。本研究还设计构建了针对沙门氏菌invA基因特定序列的质粒标准品。用质粒标准品建立的qPCR标准曲线最低可检出10copies/reaction(R2=0.9979)。构建了含有金黄色葡萄球菌nuc基因特定序列的质粒作为金黄色葡萄球菌定量检测方法的标准品，所建立标准曲线R2为0.9973，可检出14copies/reaction。质粒的构建为PMA-qPCR方法的稳定性提供了保证。本研究将PMA-qPCR活菌定量检测方法应用于畜禽肉类食品样本，通过对人工染菌的样本进行分析，对畜禽肉类样本中的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的检测范围在103~108CFU/ml。与传统培养计数法进行比较分析发现，沙门氏菌活菌定量检测结果与传统培养计数法结果、金黄色葡萄球菌与纸片计数法结果均无统计学显著性差异（P>0.05）。用PMA-qPCR方法检测畜禽肉类样品中活的沙门氏菌和金黄色葡萄球菌是对食源性致病菌活菌定量检测的一次成功尝试。PMA-qPCR技术能够有效、快速地区分活菌和死菌，实现对病原菌活菌的准确定量。PMA-qPCR技术还可推广至其他食源性致病菌，在食源性致病菌活菌定量检测领域将有更广阔的发展前景。