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研究背景 卵巢癌化疗失败的主要原因是多药耐药（MDR）产生，克服卵巢癌多药耐药是提高卵巢癌5年生存率难题之一。肿瘤多药耐药并非单一机制所致，而是基因、蛋白质和脂类等各种细胞组成成分和药物的摄取、转运、解毒、细胞凋亡、信号传导等多种细胞功能改变的结果。近年研究发现，细胞耐药与神经酰氨代谢密切相关。神经酰氨糖基化，使肿瘤细胞逃逸神经酰氨诱导的细胞凋亡，MDR细胞神经酰氨糖基化作用较敏感株增强。葡萄糖神经酰氨合成酶（GCS）是此步骤的关键酶，其在MDR中的作用，引起国内外学者的关注。 米非司酮（RU486）可以抑制神经酰氨糖基化，并通过多种途径逆转肿瘤耐药性，逆转作用强，毒副作用小。作为妇产科常用药，它是目前唯一进行大规模临床验证的孕激素拮抗剂，已经进行了大量药理学、药效学的临床研究。如果米非司酮能够在体内外增加卵巢癌对化疗药物的敏感性，将有望作为MDR修饰剂用于卵巢癌的化疗。 目的和意义 本研究采用P-gp表达阴性，对顺铂（DDP）等多种化疗药物耐药的卵巢上皮癌细胞株COC1／DDP及其亲本敏感株COC1为研究对象，以MTT技术观察无毒性剂量米非司酮体外逆转COC1／DDP细胞对顺铂的耐药性；建立卵巢癌裸鼠移植瘤耐药模型，观察米非司酮体内增强卵巢癌对顺铂的敏感性；利用分子生物学和细胞生物学的技术，观察米非司酮对葡萄糖神经酰氨合成酶表达的影响，初步探讨其增敏机制。为卵巢癌耐药逆转研究提供新的思路，为米非司酮作为MDR修饰剂用于卵巢癌的化疗提供理论依据。 方法： 一．以RU486为MDR修饰剂，体外细胞毒性实验观察人卵巢癌细胞耐药亚株COC1／DDP对DDP的耐药性、RU486对COC1／DDP的增敏效应。 二．采用COC1／DDP建立人类卵巢癌裸鼠异种移植瘤耐药模型，检测应用RU486后荷瘤裸鼠肿瘤体积变化，光镜、电镜观察移植瘤和裸鼠各主要脏器的形态学变化。三.RT一PCR技术分析COCI心DP细胞以及亲本株COC，细胞GCS在mRNA水平的表达，分析COCI心DP细胞耐药性逆转前后和瘤组织GCSmRNA表达的变化:W匕stem blot技术分析COCI用DP及COC，细胞GCS蛋白质水平的表达变化。结果:一细胞毒性实验显示，1一10料mo讥Ru486对COcl心DP细胞活力无明显抑制（P=0.951一0.395）。1 .25林mol几的RU486，逆转COCI心nP对DDP的耐药性1 .5倍;随着RU486浓度的增加，逆转倍数随之增大。10林molzL RU486 JL乎完全逆转COCI心oP对DnP的耐药性。二.检测各组裸鼠移植瘤的体积大小和肿瘤抑制率，与DDP十RU486组相比，对照组、DDP组和RU486组肿瘤体积增大，差异有显著意义 （P<0.01）。比较各组药物的抑瘤率，DDP组为21.55%，RU486组为8.98%，RU486十DDP组为70.48%，比单用DDP组提高48.93%，呈现较强的协同效应。三.病理学检查，对照组瘤细胞生长旺盛，细胞密度高，病理性核分裂相多;RU486+DDP组肿瘤细胞变性、坏死，细胞密度和病理性核分裂相减少。透视电镜显示:对照组瘤细胞呈生长活跃的肿瘤细胞结构特点;RU486+DDP组细胞呈退行性改变，可见核固缩和核边集;各给药组裸鼠心、肝、’肾、脾脏均未见病理学改变。四.RT一PCR和W七stem blot结果显示，COCI心DP细胞和敏感株COCI细胞GCS在mRNA和蛋白质水平表达有差异，COCI心DP细胞GCS表达高于敏感株COC，（P<0.01）。五.RU486抑制COCI心DP细胞GCS mRNA的表达，这种抑制调节呈浓度依赖性。经1.25林mol几Ru4s6作用，oesmRNA表达降低（尸<0.05），经5林mol几、10林mo巩RU486作用，ocs mRNA表达明显减弱，接近COC，细胞水平（尸<0.01）。RU486使移植瘤细胞GCS mRNA表达降低，（P<0.05）:RU486+DDP组移植瘤细胞GCS mRNA表达进一步降低（尸<0.01）。10林mo比Ru4s6使GCs蛋白质表达减弱。结论:一米非司酮可以在体外逆转COCI心DP细胞对DDP的耐药性，并具有明显的剂量依赖效应; ·3-二.无毒性剂量米非司酮可以在体内增加COCI/DDP对DDP的敏感性;三.米非司酮可作为MDR修饰剂应用于卵巢癌的化疗。四.细胞GCS在基因和蛋白质水平的表达影响卵巢癌MDR细胞COC’/D DP对DDP的敏感性。GCS过度表达可能是卵巢癌MDR的一种新机制;五.米非司酮逆转卵巢癌对DDP的耐药与抑制GCS表达有关。调节GCS在mRNA和蛋白质水平的表达，可能是一种新的逆转MDR途径。