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青钱柳是冰河世纪幸存下来的古老珍稀树种,零星分布在我国长江流域多省,其叶含三萜、黄酮、多糖等多种功能成分,具有降糖、降脂、保肝等多种生理和药理活性,但因繁育困难目前已濒临灭绝,是我国重点保护的濒危树种。本文采用植物细胞培养技术,建立了稳定的青钱柳细胞悬浮培养体系,绘制了悬浮培养细胞三萜指纹图谱,建立并优化了外源黑曲霉诱导子诱导细胞合成三萜的主要工艺参数,在此基础上研究了黑曲霉诱导子诱导作用的信号转导机制及MAPK途径在三萜合成中的作用,旨在为青钱柳细胞培养生产三萜类次生代谢物提供参考依据。主要研究结果和结论如下:（1）建立了稳定、可靠的青钱柳悬浮培养细胞三萜HPLC定量检测方法和细胞三萜指纹图谱。本文优化了细胞总三萜样品前处理方法和HPLC检测条件,优化后的三萜提取条件为:60℃,料液比m/v为1/50,超声辅助提取60min;优化后的HPLC条件为:210nm检测;梯度洗脱程序:0-10 min,(V甲醇)80%-82.5%;10-30 min,(V甲醇)82.5%-90%;30-40 min,(V甲醇)90%-90%;同时向甲醇和水两相中加入0.02%的冰乙酸。方法学分析结果表明,本文所建立的HPLC检测方法精确、稳定、可靠,样品回收高、重现性好,可用于三萜的定量分析和指纹图谱的建立。基于16批次青钱柳悬浮培养细胞的HPLC检测结果,建立了青钱柳悬浮培养细胞三萜指纹图谱,确定了10个特征峰,并通过指纹图谱专业软件建立了细胞三萜标准参考指纹图纹。（2）研究了黑曲霉诱导子促进青钱柳悬浮培养细胞合成三萜技术。本文以外源黑曲霉诱导子刺激细胞合成三萜,发现该诱导子能够有效地促进细胞三萜的合成,可成倍提高三萜产量,优化后的主要诱导参数如下:接种后第4天时添加质量浓度为200μg/ml的诱导子,持续作用3天（即接种后的第7天）后收获。优化作用条件下,细胞总三萜的含量和产量分别高达49.52μg/mg DW（干重）和30.42 mg/40ml,是对照组的10.79倍和10.21倍。（3）研究了黑曲霉诱导子促进三萜合成的信号机制。采用外源添加相应猝灭剂或抑制剂的方式,探索了青钱柳悬浮培养细胞中NO、H2O2、SA及JA四个信号分子在真菌诱导后细胞合成三萜中的作用和转导关系,结果表明:除SA外NO、H2O2、JA均可与三萜的合成有关,此外NO和H2O2均为通过介导JA的合成来促进胞内三萜的生成,另外仍存在其他来源的JA促进胞内三萜的产生。（4）研究了MAPK途径在诱导三萜合成中的作用。通过外源添加特异性阻断剂的方式,探索了MAPK途径中Phospho-JNK、Phospho-p38和Phospho-ERK三个途径对诱导后青钱柳细胞生长和合成三萜中的作用,发现Phospho-JNK途径对细胞三萜的合成和细胞的生长影响很大,阻断该途径会严重地影响细胞的生长和阻断诱导后细胞中三萜的合成,另外两个途径对三萜合成影响不大。综上所述,本文所建立的青钱柳悬浮培养细胞三萜HPLC定量检测方法精确、稳定、可靠,基于HPLC建立的批纹图谱可用于细胞系三萜生产性能的评价和筛选,外源添加黑曲霉诱导子能够有效地促进青钱柳悬浮培养细胞合成三萜,NO、H2O2、JA在介导诱导子促进细胞合成三萜中起到了非常重要的作用,Phospho-JNK途径对三萜合成和细胞生长均有较大影响。