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目的: 通过研究氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对血管平滑肌细胞（VSMCs）脂质沉积与细胞转型的影响，探究转录因子FoxO1在ox-LDL对平滑肌细胞的调控过程的作用，观察ox-LDL对FoxO1 DNA甲基化水平的影响，分析FoxO1启动子区DNA甲基化对平滑肌细胞脂质沉积的机制，阐明ox-LDL经FoxO1促进VSMCs脂质沉积与表型转换的机制。 方法: 采用平滑肌细胞作为实验材料，复制平滑肌细胞脂质沉积模型，先将细胞分为三组：空白对照组（0μg/ml ）、ox-LDL干预组（50μg/ml、100μg/ml），ox-LDL干预48h，油红O染色确定模型制备成功，观察平滑肌细胞脂质沉积情况，酶法检测各组细胞中总胆固醇（total cholesterol,TC）和甘油三酯（triglyceride,TG）的含量；qRT-PCR和western blot检测各组平滑肌细胞中FoxO1、smoothelin和CON1表达水平；转染FoxO1的过表达（Ad-FoxO1）腺病毒载体，荧光显微镜下观察并验证其转染效率，qRT-PCR和western blot验证过表达FoxO1后自身的mRNA及蛋白的表达；过氧化物酶法检测TC、TG含量的变化；油红O验证各组平滑肌细胞中脂质颗粒是否增加；生物信息学方法分析FoxO1基因启动子区CPG岛分布，nMSP检测各组平滑肌细胞中FoxO1的甲基化水平；用10μmol/L的甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞苷（AZC）干预细胞48h，酶法检测各组细胞中TC、TG的含量改变；qRT-PCR和western blot检测各组平滑肌细胞中smoothelin和CON1的表达改变，明确甲基化对表型转化的影响。 结果: 1.平滑肌细胞油红O染色结果显示：50μg/ml ox-LDL干预平滑肌细胞后，胞质内被红色脂质颗粒充满，形状如脂滴，胞核被染成深蓝色，与对照组和100μg/ml ox-LDL组相比，细胞内脂质颗粒增多。过氧化物酶法检测ox-LDL干预细胞结果显示：与正常对照组相比，50μg/ml ox-LDL组TG、TC含量分别升高了1.34和1.2倍（P<0.001），100μg/ml ox-LDL组TG、TC含量分别升高了0.6和0.3倍（P<0.05）。提示：ox-LDL可以促进胆固醇在平滑肌细胞内的聚积。 2.qRT-PCR和western blot检测不同浓度ox-LDL干预平滑肌细胞48h，平滑肌细胞的smoothelin和CON1随着干预浓度的增加，表达发生改变。与对照组相比，50μg/ml ox-LDL组smoothelin的mRNA和蛋白分别下降31%和58%（P<0.05），100μg/ml ox-LDL组的mRNA和蛋白表达下降46%和68%（P<0.05）。与对照组相比，50μg/ml ox-LDL组CON1的mRNA和蛋白表达分别增高0.5倍和4.1倍（P<0.05），100μg/ml ox-LDL组的mRNA和蛋白表达分别上升0.7倍、6.3倍（P<0.05）。 3.qRT-PCR和western blot检测结果显示：当50μg/ml ox-LDL刺激平滑肌细胞48h时，FoxO1 mRNA相对表达量较对照组升高1.3倍（P<0.01）,蛋白表达趋势与FoxO1 mRNA 表达趋势相一致，升高0.9倍（P<0.05）。与50μg/ml ox-LDL相比，100μg/ml组FoxO1mRNA和蛋白表达下降0.39和0.65倍，差异具有显著性（P<0.01）。 4.为明确FoxO1在ox-LDL介导平滑肌细胞内胆固醇聚积中的作用，采用FoxO1的过表达（Ad-FoxO1）转染平滑肌细胞48h，并在荧光倒置显微镜下观察转染效率，镜下可见：转染Ad-GFP组与Ad-FoxO1组内可见大量的绿色荧光蛋白，空白对照组无荧光蛋白。实时荧光定量PCR和western blot检测过表达FoxO1基因后其mRNA及蛋白的表达。结果显示，与正常对照组、空对照病毒（Ad-GFP）组相比，转染Ad-FoxO1腺病毒的平滑肌细胞内的FoxO1基因mRNA及蛋白的表达显著上调，差异有明显的统计学意义（P<0.05）。 5.用Ad-FoxO1转染平滑肌细胞后用50μg/ml ox-LD干预48h，油红O结果显示：与50μg/ml ox-LDL组相比较，Ad-FoxO1组细胞的胞质内红色脂质颗粒明显增多；酶法检测结果显示：与正常对照组相比，Ad-FoxO1组TG和TC的含量分别增加1.4和1.9倍（P<0.01）。与50μg/ml ox-LD相比，Ad-FoxO1组TG和TC的含量上升了60%和63%（P<0.01）。 6.在生物信息网站预测FoxO1的CPG岛，nMS-PCR法检测比较平滑肌细胞在ox-LDL干预下FoxO1启动子甲基化表达情况，结果显示：与正常对照组相比，50μg/ml ox-LDL组FoxO1甲基化水平下降26%（P<0.05），其蛋白水平上升了1.3倍（P<0.05）。给予甲基化抑制剂AZC（10μmol/L）培养48h，甲基化分析和western blot结果显示：AZC可抑制FoxO1启动子区甲基化水平，与对照组和50μg/ml ox-LDL组比较，AZC组的FoxO1甲基化水平分别下降50%和33%（P<0.01，P<0.05），其蛋白分别上升2.4与0.5倍，差异有显著性（P<0.01，P<0.05）。 7.甲基化抑制剂AZC（10μmol/L）干预50μg/ml ox-LDL的平滑肌细胞48h，酶法结果显示：与对照组相比，AZC组的TG、TC含量分别升高1.6和1.2倍（P<0.01）；与50μg/ml ox-LDL组比较，TG、TC含量升高50%和49%(P<0.05）。结果表明：FoxO1甲基化水平越低，脂质沉积越明显。 8.qRT-PCR和western blot检测甲基化抑制剂AZC抑制平滑肌细胞后smoothelin和CON1表达改变，检测结果显示：与正常对照组和50μg/ml的ox-LDL相比，AZC组smoothelin的mRNA与蛋白明显下降（P<0.05），CON的mRNA与蛋白上升（P<0.05）,差异有显著性。 结论: ox-LDL促进平滑肌细胞脂质沉积，诱导细胞发生成骨样转化现象的发生，是通过上调了平滑肌细胞内FoxO1 DNA甲基化水平实现的，这可能是ox-LDL致平滑肌细胞脂质聚积并最终诱导血管钙化的重要机制之一。