论文部分内容阅读
目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增和鉴定的方法体系;实验观察珊瑚羟基磷灰石(CHA)复合兔MSCs的生物相容性及诱导成骨能力,并评价其构建组织工程骨的可行性及临床应用价值。方法1兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、扩增和鉴定。穿刺抽取兔髂骨骨髓,用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,分离兔骨髓间充质干细胞,进行体外培养扩增,绘制其生长曲线,计算倍增时间,测定细胞贴壁率,用倒置显微镜观察细胞的生物学性状。通过免疫荧光组织化学鉴定细胞,了解其部分表型特点。行统计学分析,假定P<0.05有统计学意义。2兔MSCs复合CHA自体肌肉内异位成骨能力的实验研究。取生长良好的第三代细胞,将其诱导转化成为成骨细胞,接种于盘状CHA上,自体移植于兔背部肌肉内,同时植入单纯的CHA作为对照。植入4、8周后取材,形态学观察(光学显微镜)其新骨形成情况。结果1分离培养的细胞贴壁生长,呈梭形,细胞增殖能力强,原代细胞呈集落生长,12-15天达到融合,传代后增殖速度加快,平均倍增时间为34h,随传代次数的增加细胞的增殖能力有所下降,1、3、5代细胞接种12h后贴壁率在90%以上。骨髓MSCs均一表达CD44,而不表达CD34。2植入兔体内的成骨细胞/CHA复合物,在不同的时间段,都观察有新骨形成。阴性对照组未发现骨组织形成。结论1密度梯度离心与贴壁培养相结合,可有效分离和扩增骨髓MSCs;分离培养的骨髓MSCs生长稳定,增殖力强,可选用前5代传代细胞作为骨组织工程的种子细胞;细胞表面标志CD34阴性、CD44阳性可作为鉴定骨髓间充质干细胞(MSCs)的一种方法。2成骨细胞/CHA复合物具有异位成骨作用,显示出良好的应用前景;CHA具有良好的生物兼容性和多孔网状结构,可以作为支架材料用于构建组织工程骨。