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结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）是引起结核病的病原菌,是当前肆虐全球、严重危害人类健康的重要传染病。随着人口流动增加、多重耐药菌株的出现以及HIV与结核分支杆菌伴发感染,结核分支杆菌的感染和传播呈逐年上升趋势,已成为全球严重的公共卫生和社会问题。早期诊断及规范治疗是主要的防控策略,临床上急需特异而灵敏的的快速诊断方法。PE/PPE蛋白家族随着结核分支杆菌全基因序列测序的完成而发现,推测它们可能具有重要的免疫学价值,有助于研究开发新型特异性诊断试剂和有效的结核疫苗。本研究通过生物信息学分析结核分支杆菌所特有的全部167个PE/PPE,并进行膜蛋白或分泌蛋白的预测,选取与BCG相似性较低的PE/PPE,并结合RD1～RD16区的PE/PPE基因分布及优势抗原表位分析,最终选取三个PE/PPE目的基因作为研究对象,分析具备优势抗原表位的重组蛋白片段可能为结核诊断的研究提供新的备选抗原。成功构建了3个重组表达质粒pET-28a（+）-Rv342519～176、pET-28a（+）-Rv387321～235、pET-28a（+）-Rv2487c421～694,原核表达纯化出具有优势抗原表位的蛋白片段,与rCFP10- ESAT6共同进行主要抗原性分析。重组蛋白的Western印迹分析显示,rRv387321～235、rCFP10-ESAT6与rRv342519～176显示出良好的反应原性;而rRv2487c421～694未检测到阳性条带。ELISA结果显示,rRv342519～176、rRv387321～235和rCFP10-ESAT6在结核抗体检测中的敏感性和特异性分别为39%和97.5%,28%和94.6%, 37%和95%。而将rRv342519～176与rCFP10-ESAT6的ELISA结果合并分析,检测的敏感性可提高到57%,初步显示了rRv342519～176和rCFP10-ESAT6存在一定的抗原互补性,可提高诊断的敏感性并为抗原的联合诊断提供参考。ELISPOT结果显示,rRv2487c421～694和rCFP10-ESAT6检测28例结核病患者阳性率分别为78.6%、75%,检测21例健康者的阳性率分别为19%、23.8%,而rRv387321～235和rRv342519～176均未出现斑点反应。rRv2487421～694作为未见报道的抗原,本试验结果显示其与CFP10-ESAT6的ELISPOT检测结果相近,提示可能作为以T细胞为基础的结核诊断试验的备选抗原。综上所述,本研究通过生物信息学预测的基因抗原表位,为寻找更好的抗原靶位提供了参考。具有优势抗原表位的重组蛋白片段,在结核病诊断中具备一定的潜在应用价值,可与其它备选抗原联合辅助诊断提供参考。