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口腔黏膜鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC,以下简称口腔鳞癌)可能与口腔微生物密切相关。口腔微生物对宿主细胞有直接毒性作用,也可通过慢性炎症间接作用以及在肿瘤信号转导通路引起独立突变,促进肿瘤的发生发展,但目前对口腔鳞癌相关致病菌及促肿瘤侵袭转移机制尚缺乏研究。目的:通过筛选唾液中口腔鳞癌可能的相关致病菌,探讨特定癌相关致病菌与口腔鳞癌侵袭转移的机制,为口腔鳞癌的早期诊断和防治提供新思路。材料与方法:临床收集口腔鳞癌患者和健康人唾液样本,通过16S rDNA测序和生物信息学方法筛选与口腔鳞癌相关的口腔致病菌;临床采集9对口腔鳞癌患者的癌组织与癌旁组织,采用荧光原位杂交技术定位及定量口腔鳞癌可能相关致病菌在口腔癌组织病理切片中的信号强度,为进一步体外研究致病菌对口腔鳞癌细胞的影响奠定基础;收集口腔鳞癌相关致病菌的上清液,刺激口腔鳞癌细胞SCC9、Cal27,观察口腔鳞癌细胞SCC9、Cal27刺激前后的形态学变化,采用CCK-8、细胞侵袭、迁移等实验检测口腔鳞癌细胞系SCC9、Cal27的生物学行为变化,同时检测EMT相关指标的表达变化,研究相关微生物促口腔鳞癌侵袭转移的机制。结果:通过16S rDNA测序,对照组与实验组的α-多样性相关指标ACE、Chao1、Simpson和Shannon差异明显;主成分分析(PCA)显示两组所有菌群和致病菌群结构都存在明显差异(PC12=57.6%和61.8%);结合LDA Effect Size分析(LEf Se)分析和Mann-Whitney U检验筛选出Streptococcus、Capnocytophaga、Peptostreptococcus、Prevotella和Lactobacillus菌属在口腔鳞癌唾液中相对丰度显著高于正常人群(p<0.05)。通过荧光原位杂交验证Streptococcus、Capnocytophaga、Peptostreptococcus、C.gingivalis定位于口腔鳞癌组织中,且信号强度高于癌旁组织,揭示这些相关菌可能侵入癌组织中,作用于口腔鳞癌细胞。采用C.gingivalis条件培养基刺激口腔鳞癌细胞SCC9和Cal27 2h,细胞形态由典型的铺路石样逐渐伸长,向成纤维样形态转变,在此基础上,通过transwell侵袭及迁移实验发现C.gingivalis条件培养基刺激后的SCC9和Cal27侵袭及迁移能力明显增强。在m RNA水平上,上皮间充质转化相关指标E-cadherin、β-catenin表达降低,而vimentin、SNAIL表达升高;在蛋白水平进一步验证,E-cadherin、β-catenin表达降低,而vimentin、SNAIL表达升高,这表明C.gingivalis可通过诱发EMT以促进口腔鳞癌细胞侵袭转移。结论:唾液微生物Streptococcus、Capnocytophaga、Peptostreptococcus、Prevotella和Lactobacillus菌属与口腔鳞癌密切相关,且可能侵入癌组织内造成影响;其中C.gingivalis在口腔癌中发挥重要作用,可通过诱导口腔鳞癌细胞发生上皮间充质转化,促进了口腔癌的侵袭和转移。以上结果有可能成为OSCC的早期诊断和防治提供新的思路。