小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种山羊、绵羊等小反刍动物的急性、接触性传染病,世界动物卫生组织(OIE)将其定为A类动物疫病。据农业部公告,2007年7月在我国西藏日土县发生小反刍兽疫疫情,这是我国首次报道该病。因此,在我国开展小反刍兽疫的病原学、流行病学和诊断研究具有重要意义。本研究将小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株在Vero细胞中传代培养,然后提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆至pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-F,测定F基因序列并对其编码的蛋白进行结构预测和分析。以pMD18-F质粒为模板,根据结构预测结果,克隆除去N端信号肽和跨膜区的F基因片段,将其亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组表达质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE、Western-blot分析表达产物,同时用重组F蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价并用间接免疫荧光检测该多抗与PPRV Nigeria 75/1株全病毒的反应性。结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,重组蛋白免疫家兔3次后,血清抗体达到较高水平。Western-blot分析表明,表达产物能与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示,重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原,说明重组蛋白具有较好的反应原性。将重组F蛋白纯化后免疫3月龄山羊,每隔一周用间接ELISA测定抗体效价,结果显示,重组F蛋白能够诱导山羊产生特异性的体液免疫应答。以纯化的重组F蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤细胞技术,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。经过多次克隆化和间接ELISA筛选,获得了五株能分泌抗F蛋白抗体的杂交瘤细胞株,用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定,其中3株为IgG2a亚类,1株为IgG2b亚类,1株为IgA亚类,经Western-blot分析表明,杂交瘤细胞分泌的抗F蛋白能够与重组融合蛋白发生特异性反应,生物学特性鉴定显示,获得的杂交瘤细胞分泌抗体具有较好的稳定性,这为进一步建立基于该单抗的小反刍兽疫检测方法提供了依据。