红景天及其内生真菌的ISSR、RAPD遗传多样性分析

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红景天属植物主要布于我国西南、东北、西北及华北等高寒山区。现代药理学研究表明,红景天具有增强运动耐力、抗氧化、抗糖尿病等生理活性,被广泛应用于医药、保健品、化妆品等产业。本研究一方面是对四个品种的野生红景天进行遗传多样性分析,比较RAPD和ISSR二种标记方法的优劣,建立它们的标记特征图谱库;另一方面通过抗氧化活性菌株与宿主植物的共培养,研究内生真菌与宿主之间的相关性基因簇;最后分析23株内生真菌的ISSR的遗传多样性。旨在研究红景天及其内生真菌的分子遗传多样性及它们之间的相关性。结果表明:(1)将筛选后的11条RAPD引物通过RAPD分子标记后共扩增出96条条带,多态性百分比为90.62%;11条ISSR引物共扩增出102条条带,多态性百分比为100%。ISSR多态性的检测能力优于RAPD;聚类分析结果表明,ISSR法、RAPD和ISSR联用法均将17个样品聚为3大类;RAPD将样品聚为4大类。长白红景天与库页红景天的遗传距离较近,大花红景天与柴胡红景天的遗传距离较近。两种标记均可用于红景天属植物种间亲缘关系与种内的遗传多样性研究;四种红景天种内存在一定的遗传差异,种间基因流较小。(2)将具有抗氧化活性的内生真菌ZPRs-R-11与大花红景天组培苗互作15 d,每天取一次样,然后将互作后的样品进行RAPD的多样性分析。12条RAPD引物共扩增出87条条带,多态性条带73条,多态性百分比为83.91%。基因流Nm=0.2098<1,说明菌苗互作后真菌与宿主植物发生了一定程度的遗传交换,但交换率较低。聚类结果表明:当遗传相似系数为0.7400时,17个样品可以聚为三大类。将具有抗氧化活性的内生真菌ZPRa-R-1与大花红景天组培苗互作15 d,每天取一次样,然后将互作后的样品进行ISSR的多样性分析。12条ISSR引物共扩增出94条条带,多态性条带82条,多态性百分比为87.23%。基因流Nm=0.1388<1,说明菌苗互作后真菌与宿主植物发生了一定程度的遗传交换,但交换率较低。聚类结果表明:当遗传相似系数为0.7400时,同样可以将17个样品聚为三大类,其聚类结果同ZPRa-R-1与大花红景天组培苗互作15 d后的聚类结果相同。(3)运用ISSR分子标记研究23株红景天内生真菌的遗传多样性,11条ISSR引物共扩增出142条条带,多态性条带141条,多态性百分比为99.29%,其中8株来源于库页红景天的内生真菌的遗传多样性最大为80.85%,菌群相对较丰富。在遗传相似系数0.7200处,可将23株红景天内生真菌划分为5个类群。聚类结果表明,同一菌属间的遗传相似系数高,不同菌属间的遗传相似系数低且供试菌株间的遗传相似性与宿主来源无明显相关性。
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