多囊卵巢综合征((polycystic ovary syndrome, PCOS)是育龄妇女最常见的内分泌异常性疾病。PCOS患者双侧卵巢存在大量小窦卵泡（直径：2-9mm），但卵泡发育障碍，不能周期性产生成熟卵泡。其机制可能与卵泡的选择、发育及闭锁的调控异常有关。大量研究揭示，在卵泡的生长发育过程中，细胞凋亡起着重要的作用，凋亡可发生在卵子生成、卵泡形成及卵母细胞选择/丢失和闭锁中。胎儿期，凋亡主要涉及卵母细胞；生育期，凋亡主要累及生长卵泡的颗粒细胞，故PCOS患者可能存在异常的颗粒细胞凋亡调控。研究证明PCOS卵巢颗粒细胞存在异常凋亡。内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)是内质网生理功能发生紊乱的一种病理状态，是机体的一种自我防御机制，过度的ER应激将导致细胞凋亡。ER应激启动的凋亡途径是近年新发现的一种不同于死亡受体途径和线粒体途径的信号转导凋亡途径。它通过激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)以保护由ER应激所引起的细胞损伤，恢复细胞功能。但如果ER应激过强或持续时间过长，则诱导细胞凋亡。由促生存响应转为促凋亡反应。近年来研究发现ER应激与代谢类疾病的发生密切相关，在代谢综合征中的研究十分广泛， PCOS患者存在多种代谢异常,但关于ER应激与PCOS的关系目前国内外尚未见报道。因BiP、CHOP是ER应激的两个标志性蛋白，且PCOS患者存在多种代谢异常和卵巢颗粒细胞的异常凋亡，因此本文采用RT-PCR和Weston blotting方法在基因和蛋白水平观察BiP、CHOP在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达变化，以探讨ER应激是否参与PCOS的发病。目的：旨在研究多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上内质网应激蛋白BiP、CHOP蛋白的表达水平。初步探讨ER应激是否参与PCOS的发病。方法：收集45例PCOS不孕患者在安徽医科大学第一附属医院生殖中心行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞。PCOS的诊断均符合PCOS鹿特丹诊断标准，年龄在18~35岁之间，并排除经过相关治疗的患者。同时收集同期同年龄段因男方因素不孕患者行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞45例作为对照组，月经周期规则，并排除鹿特丹标准中月经规律的PCOS患者。该实验经临床研究伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。(1)应用RT-PCR方法检测内质网应激蛋白BiP、CHOPmRNA在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平，比较两组之间是否存在差异；(2)应用Western-blotting方法检测内质网应激蛋白BiP、CHOP蛋白在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平，以验证RT-PCR的检测结果。HOMA-IR(HOMAinsulin resistance index)=GLU×INS/22.5。当HOMA-IR≥1.66时，表示患者存在胰岛素抵抗。游离睾酮指数(FTI)=T(nmol/L)×100/SHBG (nmol/L)，当FTI≥3.36，时表示患者存在高雄激素血症。结果1．两组患者临床指标的比较PCOS患者的平均年龄（28.68±3.63）岁，对照组平均年龄（29.96±4.20）岁。两组间年龄、雌激素（E2）、卵泡刺激素（FSH）、空腹血糖（GLU）、泌乳素（PRL）、Gn天数、Gn支数、获卵数、受精数、卵裂数、MII卵数、受精率和卵裂率之间比较差异无统计学意义（P>0.05）；两组间体重指数（BMI）（23.10±3.27VS21.36±2.68）、黄体生成素（LH）（9.43±6.09VS4.80±2.92）、雄烯二酮（A2）（3.02±1.09VS1.81±0.63）、雄激素（T）（1.82±0.93VS1.12±1.29）、胰岛素（INS）（10.60±5.20VS8.60±3.40）及HOMA-IR（2.50±1.31VS1.99±0.84）之间比较PCOS患者均高于对照组患者，差异有统计学意义（P<0.05）。而PCOS患者的性激素结合球蛋白（SHBG）（42.37±27.90）明显低于对照组患者的SHBG（55.47±23.64），差异有统计学意义（P<0.05）。2.内质网应激标志性蛋白BiP、CHOPmRNA在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平PCOS组患者卵巢黄体颗粒细胞上BiP mRNA的表达明显高于对照组(1.09±0.63VS0.79±0.34)，差异有统计学意义(P=0.021)。PCOS组患者卵巢黄体颗粒细胞上CHOP mRNA的表达较对照组有增高趋势（0.45±0.20VS0.40±0.18），但差异无统计学意义(P=0.061)。3．内质网应激标志性蛋白BiP、CHOP蛋白在卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平PCOS组患者卵巢黄体颗粒细胞上BiP蛋白条带灰度值高于对照组(0.56±0.13VS0.40±0.17)，两组比较有统计学差异(P=0.040)。PCOS组患者卵巢黄体颗粒细胞上CHOP蛋白条带灰度值较对照组有增高趋势（0.62±0.26VS0.56±0.17），但差异无统计学意义(P=0.261)。Western blotting检测结果与RT-PCR结果基本一致。4．BiP及CHOP mRNA在PCOS胰岛素抵抗组与非胰岛素抵抗组卵巢黄体颗粒细胞上的表达BiP mRNA在胰岛素抵抗的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非胰岛素抵抗组显著增高（1.41±0.88VS0.80±0.31），差异有统计学意义（P=0.004）。CHOP mRNA在胰岛素抵抗的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非胰岛素抵抗组显著增高（0.50±0.16VS0.38±0.19），差异有统计学意义（P=0.025）。5． BiP、CHOP mRNA在PCOS高雄激素血症组与非高雄激素血症组卵巢黄体颗粒细胞上的表达BiP mRNA在高雄激素血症的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非高雄激素血症组明显增高（1.28±0.72VS0.77±0.67），差异有统计学意义（P=0.031）。CHOP mRNA高雄激素血症的PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达水平较非高雄激素血症组明显增高（0.49±0.20VS0.34±0.08），差异有统计学意义（P=0.011）。结论:PCOS组患者卵巢黄体颗粒细胞上内质网应激标志性蛋白BiP、CHOP的表达异常，尤其在高胰岛素血症组和高雄激素血症组，提示PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞存在异常凋亡，内质网应激可能参与PCOS的发病。