背景及目的：根据《2013中国肿瘤登记年报》，我国肺癌发病形势非常严峻，发病率和死亡率均居恶性肿瘤之首。尽管大量科研投入，肺癌的治疗并不令人满意，随着近年来肺癌分子靶向药物带来临床获益的同时，人们逐渐认识肺癌的个体化治疗的重要性。肺癌的个体化治疗的前提是对肺癌分类进行细化，在过去，人们只是将肺癌简单分为鳞癌、腺癌、小细胞癌和大细胞癌，2011年出台了肺腺癌国际多学科新分类，腺癌（手术标本）可分为浸润前病变、微浸润腺癌、浸润型腺癌以及浸润型腺癌的变异型，事实上，肺癌的组织学分类远远不够，表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）突变型和野生型肺癌患者对酪氨酸激酶抑制剂截然不同的治疗反应令很多医生及科研人员受到启发，单纯对肺癌进行组织学分类太粗放了，应该对肺癌进行细胞学，甚至分子学、基因型分类。从细胞学分类角度，原发性肺腺癌在电镜下依据其超微结构可以分为：类气道上皮细胞型、类杯状细胞型、类支气管腺细胞型、类clara细胞型、类Ⅱ型肺泡上皮细胞型和混合型，其中clara样肺癌细胞和Ⅱ型肺泡上皮样癌细胞，光镜下细胞形态极为相似，难以区分，电镜下clara样肺癌细胞的标志性结构是类似肺clara细胞内的分泌颗粒——clara颗粒，Ⅱ型肺泡上皮样癌细胞的标志性结构是类似Ⅱ型肺泡上皮细胞中的板层小体，只有在电镜下通过形态学观察才能对这两种癌细胞进行鉴别。由于电镜检测价格昂贵、取材要求高、制样复杂、工作周期长，难以在临床广泛开展，因此临床上难以对肺癌进行细胞学分型，继而影响了基于细胞学分型的医学研究。本研究拟通过蛋白质组学方法寻找鉴别clara样肺癌细胞和Ⅱ型肺泡上皮样癌细胞的肿瘤标志物，便于临床医生和科研人员通过免疫组化等简便经济的方法鉴别这两种细胞。方法：用相同的条件培养人clara样肺癌细胞系NCI-H358与Ⅱ型肺泡上皮细胞样肺癌细胞系A549，选取不同的4代细胞，分为NCI-H358组和A549组，待细胞进入对数生长期后，提取总蛋白，应用2D-DIGE（二维荧光凝胶差异电泳）方法分离蛋白质，DeCyder差异凝胶分析软件分析并比较蛋白点表达量，制备胶挖点，选择差异表达5倍以上或接近5倍的蛋白点进行质谱鉴定，对所鉴定的蛋白点进行western blot验证，经过western blot验证的蛋白质中选择两组间表达差异显著的蛋白质进行免疫组化和透射电镜初步临床验证。收集32例外科手术肺癌标本，相邻组织分为2块，1块固定于10%中性缓冲福尔马林溶液中，通过免疫组化法检测ERO1L（内质网氧化物样蛋白α）的表达情况，另1块置于2.5%戊二醛固定液中避光4℃保存，根据免疫组化表达情况选择平均阳性细胞率高于50%以及ERO1L表达全阴性肺癌组织进行透射电镜检测，确定其肺癌细胞类型。结果：经过蛋白质组学研究，两组间共找到38个差异蛋白点，其中8个蛋白点差异量达到5倍以上或接近5倍，经过质谱检测，鉴定出5种蛋白质，分别是UCHL1（泛素羧基末端水解酶L1）、CK19（细胞角蛋白19）、CK8（细胞角蛋白8）、ERO1L和PRDX2（过氧化物酶2），其中UCHL1在A549细胞中高表达，CK19、CK8、ERO1L和PRDX2在NCI-H358细胞中高表达，通过western blot验证，ERO1L在NCI-H358细胞中表达显著高于A549细胞（p=0.02），而UCHL1在A549细胞和NCI-H358细胞中表达差异无统计学意义。免疫组化提示ERO1L胞浆表达为主，偶见核表达，总阳性率为72.4%，鳞癌中ERO1L阳性率为83.3%，腺癌中ERO1L阳性率为66.7%，鳞癌和腺癌ERO1L阳性率差异无统计学意义（P=0.41），ERO1L很少弥漫性表达，ERO1L平均阳性细胞率占76%以上其构成比仅为17.3%，而ERO1L阳性表达率居于0-25%之间者其构成比为62.1%，多数样本ERO1L表达强弱分明，阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性表达均存在，根据免疫组化结果选择5例ERO1L阳性腺癌组织、5例ERO1L全阴性腺癌组织、2例ERO1L阳性鳞癌组织、1例ERO1L全阴性鳞癌组织、1例大细胞癌（ERO1L阳性）、1例小细胞癌（ERO1L阴性）共15例肺癌组织进行电镜观察，发现5例ERO1L阳性肺腺癌组织中4例为肺clara样癌细胞，ERO1L阴性肺癌组织电镜下均未找到肺clara样癌细胞。结论：ERO1L有望成为鉴别人肺腺癌中肺clara样癌细胞亚型的肿瘤标志物，尚未找到鉴别Ⅱ型肺泡上皮样肺癌细胞的理想标志物。