轮状病毒(rotavirus, RV)是婴幼儿胃肠炎的主要病原体,据统计全球每年死于RV感染者约611000,RV感染绝大多数发生在发展中国家。轮状病毒属于呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),是一个直径约为70 nm,无包膜,由三层衣壳蛋白组成的正二十面体双链RNA病毒。RV基因组包含11个分节段的双链RNA,编码6个结构蛋白(VP1-VP4, VP6, VP7)和6个非结构蛋白(NSP1-NSP6).根据结构蛋白VP6的抗原性差异,可将已发现的轮状病毒分为A-G等7个组,其中,A组为引起婴幼儿腹泻的主要病原体。作为RV主要结构蛋白,VP6在维持病毒形态、病毒进入细胞、基因组复制和组装过程中作为一个物理受体,具有重要的生物学功能。随着研究的不断深入,近年发现VP6蛋白在免疫保护反应方面也具有重要作用,在研制RV重组疫苗中可能具有潜在的应用价值。重组痘苗病毒/T7 RNA聚合酶是一瞬时表达系统,由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。在本实验中,TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重组表达质粒PET-VP6通过脂质体转染到真核细胞MA104中,用携带噬菌体T7 RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF7-3再感染,可在细胞中检测到目的蛋白VP6的表达。研究结果还显示,痘苗病毒vTF7-3感染后,细胞病变较快,严重影响了蛋白的表达量。结果提示,如果能降低痘苗病毒vTF7-3的致细胞病变作用而不影响其在细胞中合成T7 RNA聚合酶的能力,蛋白可能会得到高效表达。本实验为研究原核基因在真核细胞中的表达、进一步研究VP6的免疫学特性以及更好地应用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶这一瞬时表达系统提供了重要理论基础。