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目的克隆人血管生成素1基因(hAng1),采用AdMax包装系统构建含人血管生成素1的重组腺病毒质粒,为研究血管生成素1对急性肺损伤中炎症消退的作用奠定基础。方法将hAng1 cDNA克隆于真核表达载体pDC315-EGFP,得到重组质粒pDC315-EGFP-Ang1,采用位点特异性重组系统(Cre/Loxp)将pDC315-EGFP-Angl与pBHG lox△E1,3Cre辅助包装质粒共转染至HEK293细胞,生成带有Angl基因的重组腺病毒载体Ad-EGFP-Ang1,重组腺病毒质粒在HEK293细胞中扩增,氯化铯梯度离心纯化。检测转染的HEK293细胞中以及细胞培养上清中的Ang1蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实载体构建的正确性,病毒滴度为1.5×1012 PFU·mL-1。Ad-EGFP-Ang1转染的HEK293细胞和细胞培养上清中均检测出Ang1蛋白。结论带有hAng1 cDNA的重组腺病毒载体构建成功,可用于对急性肺损伤炎症消退的影响的研究。目的气管滴入脂多糖复制小鼠急性肺损伤模型,为进一步探讨炎症反应过程奠定基础。方法将20只SPF级雄性BALB/c小鼠(20-25g)随机分为对照组和脂多糖组,每组10只小鼠,麻醉后分别经气管插管滴入生理盐水(对照组)和脂多糖3mg·kg-1(脂多糖组)。观察24小时死亡率、肺组织湿干重比、病理改变,肺泡灌洗液中的白细胞计数、中性粒细胞计数和总蛋白浓度。结果脂多糖组小鼠死亡率33.3%,对照组没有小鼠死亡。脂多糖组肺组织病理评分、肺组织湿干重比、肺泡灌洗液中的白细胞计数、中性粒细胞计数和总蛋白浓度均高于对照组,(P=0.001)。结论气管滴入脂多糖3 mg·kg-1成功模拟了ALI的过程,是进一步探讨炎症反应过程的可靠的ALI动物模型。目的通过基因转染增加血清中血管生成素1(Angl)的浓度,探讨血管生成素1基因治疗对急性肺损伤炎症消退的影响。方法SPF级BALB/c小鼠气管内滴入脂多糖构建急性肺损伤动物模型前,经尾静脉注入空载体病毒(Ad-GFP, GFP组)或者携带血管生成素1的腺病毒(Ad-GFP-Ag1, Ang1组)。经气管滴入脂多糖后4h、12h、24h、48h、72h、96h处死小鼠,取肺泡灌洗液收集细胞,行细胞计数分类,并用流式检测中性粒细胞凋亡和被巨噬细胞吞噬情况。收集肺组织和肝脏组织以及血清,检测血管生成素1的基因和蛋白表达。检测肺泡灌洗液中的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子浓度变化。另外取4只小鼠,静脉注入空载体病毒,24小时后气管滴入生理盐水作对照组。结果LPS气管滴入后大量的白细胞浸润到肺组织和肺泡腔,早期以中性粒细胞为主,在48h白细胞和中性粒细胞达到最大值。Angl预处理增加了angl在肝脏的表达,分泌到血清中,减少了炎性细胞浸润并促进了中性粒细胞的凋亡和吞噬,从而加速了中性粒细胞从组织的清除,同时,增加了肺泡灌洗液中的粒细胞单核细胞集落刺激因子浓度。结论血管生成素1预处理促进了急性肺损伤炎症消退,这与其促进中性粒细胞的凋亡和巨噬细胞吞噬有关。1经颈透照明视下完成并证实小鼠气管插管成功,经气管插管滴入3mg·kg-1脂多糖可以成功复制ALI模型。2脂多糖3mg·kg-1气管滴入后48小时,肺组织炎症达高峰,随后进入炎症消退期。血管生成素1预处理有效的稳定血管内皮细胞,减少蛋白渗出,抑制了炎症细胞组织浸润。3血管生成素1促进了急性肺损伤炎症消退。其机制是血管生成素1通过稳定血管内皮细胞促进炎症组织中性粒细胞凋亡,促进巨噬细胞吞噬凋亡的中性粒细胞。4血管内皮细胞参与了炎症消退过程。5血管内皮细胞可能是急性肺损伤防治的一个重要的潜在的靶点。