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西格列汀磷酸盐是FDA批准上市的第一个二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-4)抑制剂,用于治疗Ⅱ型糖尿病,服用安全,耐受性好,不良反应少。目前,虽有报道西格列汀含量检测的方法,但这些方法并不系统。同时也没有相关的报道涉及西格列汀及其有关物质的分离检测方法。本论文主要使用高效液相色谱仪,首先对西格列汀美国药典(USP)讨论稿进行反向研究,确定在实际应用中西格列汀含量检测的最优方法;其次建立合成路线中的工艺杂质及降解杂质分析分离方法,并进行方法学验证;另外对西格列汀异构体的检测方法,进行方法验证,为该药的进一步生产、检测和使用提供参考依据。具体分为以下三个部分:第一部分介绍了糖尿病和DPP-4抑制剂的概况,概述了高效液相色谱技术在医药领域中的应用,并总结了西格列汀的分析研究现状。第二部分对西格列汀USP讨论稿中的分析方法进行研究,确定了西格列汀实际应用中的色谱条件:采用Agilent ZORBAX SB-CN 5 μm 150×4.6 mm色谱柱,色谱柱温度30℃,流速1mL·min-1,检测波长210nm,等度洗脱方法为:缓冲液-乙腈(15%-85%)(v/v)等度洗脱20 min。通过方法验证,结果显示该方法稳定、准确、重现性高。其中西格列汀在0.37 mg·mL-1～0.60 mg·mL-1浓度范围内西格列汀线性回归方程为:y =.250.44x-3.2639(R2= 0.9939)有良好的线性关系。第三部分建立了西格列汀有关物质色谱分析方法并进行了方法验证:(1)西格列汀降解杂质检测的色谱条件:采用Agilent ZORBAX SB-CN5μm 150×4.6 mm色谱柱,色谱柱温度30℃,流速1mL·min-1,检测波长210nm,梯度洗脱方法为:乙腈-缓冲液(15%-85%)v/v)等度洗脱18 min,2min将乙腈含量提到37%,并且等度洗脱到35 min,检测结束。通过对该方法进行验证,结果显示该方法稳定、准确、重现性高。(2)西格列汀合成路线一原料及中间体检测的色谱条件:采用Phenomenex Luna 250×4.6 mm 5 μmC18色谱柱,色谱柱温度30℃,流速1 mL.min-1,检测波长210 nm,等度洗脱方法为:乙腈-缓冲液(40%-60%)(v/v)等度洗脱30 min。通过对该方法进行验证,结果显示该方法稳定、准确、重现性高。(3)西格列汀合成路线二原料及中间体检测的色谱条件:采用Phenomenex Luna 250×4.6 mm 5 μm C18色谱柱,色谱柱温度30℃,流速1 mL·min-1,检测波长210 nm,梯度洗脱方法为:乙腈-缓冲液(18%-82%)(v/v)等度洗脱6 min,1 min内将乙腈的含量提到31%等度洗脱到18 min,再2 min内将乙腈含量提到70%,持续洗脱10 min,30 min检测结束。通过方法验证,结果显示该方法的稳定性好,重现性和准确度高。(4)对已有的西格列汀异构体液相检测方法进行方法学验证,其中西格列汀主峰与异构体之间的分离度为4.01;异构体在3.00～12.00μg·mL-1范围内,R2为0.9982,具有良好的线性关系。结果显示该方法稳定、准确、重现性高。