肝素酶来源于肝素黄杆菌,是一类能够特异性降解肝素和乙酰肝素的多糖裂解酶。目前研究发现,肝素酶在制备低分子量肝素、抑制肿瘤细胞增殖,清除血液中残留肝素等方面具有重要的生物学作用,受到越来越多人的关注。目前研究最多的是肝素酶Ⅰ,肝素酶Ⅰ在重组大肠杆菌中可溶性表达低,导致其产量较低,纯化较难,成本较高等问题,限制了其在医药方面的应用。因此寻找合适的方法来提高肝素酶Ⅰ的产量和纯度具有重要的意义。分子伴侣素CpkA是从嗜热菌Thermococcus kodakarensis中发现的耐热伴侣蛋白,具有辅助蛋白折叠功能和ATPase活性。本文构建重组质粒pACYC-CpkA和切去前导肽并加上带正电signal-tag的HepI’-28a质粒,并以单转或共转化形式转入大肠杆菌E.coli DE3(BL21)中诱导表达,通过镍柱纯化,除盐柱除盐,阳离子交换柱层析等优化纯化方式获得可溶性的HepI’蛋白;同时在E.coli DE3-RIPL中原核表达分子伴侣素CpkA,经85℃热处理1h、饱和度为80%的硫酸铵沉淀、透析除盐和阴离子交换柱层析,获得高纯度CpkA蛋白;利用本文制备的分子伴侣素CpkA蛋白在体外与HepI包涵体蛋白进行尿素梯度复性研究;实验结果表明:去除前导肽后,肝素酶Ⅰ的可溶性表达量明显增加,与CpkA共表达后,包涵体蛋白进一步较少,最终纯化得到大小为43 kDa,纯度90%以上,最大浓度为0.404 mg/ml的HepI’蛋白,酶活为27.16 IU/mg;原核表达获得大小为59.17kDa,纯度为93%以上,浓度为2.706 mg/ml的CpkA蛋白,其ATPase活性为539IU/mg;利用纯化的CpkA蛋白帮助HepI包涵体蛋白进行体外尿素梯度梯度复性,包涵体蛋白回收率约为50%,复性蛋白无明显肝素酶Ⅰ活性。本研究工作为肝素酶Ⅰ的大量制备提供了一种新的方法,为肝素酶Ⅰ在医药方面的广泛应用奠定了物质基础。也为分子伴侣素CpkA能够在体内环境下帮助异源蛋白折叠提供了实验依据。