论文部分内容阅读
目的本实验通过建立间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)大鼠模型以模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者夜间反复出现的低氧/复氧病理生理过程,探究IH大鼠肾脏损伤与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径中Caspase-12mRNA、JNKmRNA和CHOPmRNA表达的内在关系,及洛沙坦的干预作用,为临床防治OSAHS所致肾脏损伤提供新的诊疗思路和理论依据。方法选取60只SPF级健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为4组,每组15只。A组:空白对照组,即常氧环境,自由活动;B组:IH组,置于间歇性低氧舱内自由活动;C组:IH+洛沙坦组,每日腹腔注射洛沙坦30mg/kg,置于间歇性低氧舱内自由活动;D组:IH+生理盐水组,每日腹腔注射同剂量生理盐水作平衡对照,置于间歇性低氧舱内自由活动。每日造模时间为8小时(早09:00-晚17:00),连续6周。造模结束后,检测各组大鼠肾功能血清学指标;光镜下观察大鼠肾脏组织苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色的表现;透射电镜下观察大鼠肾脏超微结构的改变;TUNEL(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling)法检测大鼠肾脏细胞凋亡指数;rt-PCR法检测大鼠肾脏组织中Caspase-12mRNA、JNKmRNA、CHOPmRNA的表达情况。结果1.B组和D组大鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平显著高于A组(P均<0.01),C组大鼠BUN水平低于B组和D组(P均<0.05);B组和D组大鼠血清肌酐(creatinine,CREA)水平均高于A组(P<0.01;P<0.05),B组、C组、D组间CREA水平差异无统计学意义(P>0.05)。2.HE染色显示:A组肾脏组织形态基本正常;B组和D组肾小管上皮细胞高度肿胀,管腔有不同程度的狭窄;C组部分近曲肾小管上皮细胞轻度水肿,管腔无明显狭窄。3.透射电镜显示:A组肾小管上皮细胞未见明显异常;B组和D组肾小管上皮细胞游离面微绒毛明显稀疏、脱落,细胞核固缩,细胞器出现不同程度的肿胀和溶解。C组肾小管上皮细胞游离面微绒毛少部分出现倒伏、稀疏,少量细胞核呈异型,细胞器轻度肿胀。4.TUNEL法检测细胞凋亡显示:B组和D组大鼠肾脏细胞凋亡指数较A组相比显著升高(P均<0.01);与C组比较,B组和D组大鼠肾脏细胞凋亡指数显著升高(P均<0.01)。5.Pearson相关性分析显示各组大鼠肾脏细胞凋亡指数与BUN水平呈显著正相关(r=0.831,P<0.01),与CREA水平亦呈正相关(r=0.581,P<0.01)。6.rt-PCR结果显示:与A组比较,B组和D组大鼠肾脏组织中Caspase-12mRNA、JNKmRNA和CHOPmRNA的表达量明显升高(P均<0.01);经给予洛沙坦干预后,C组大鼠肾脏组织中Caspase-12mRNA的表达量较B组和D组降低(P<0.01;P<0.05);C组JNKmRNA的表达量较B组和D组无统计学差异(P均>0.05);C组CHOPmRNA的表达量较B组和D组明显降低(P均<0.01)。结论1.IH可能通过诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡导致肾脏组织的超微结构改变和肾功能的损伤。2.IH可能通过激活ERS凋亡通路中Caspase-12mRNA、JNKmRNA和CHOPmRNA的表达引起肾小管上皮细胞凋亡。3.洛沙坦可能通过抑制ERS凋亡通路中Caspase-12mRNA和CHOPmRNA的表达对肾脏起到保护性作用。