非生物胁迫下蓝莓VclncRNA001在种子萌芽中的功能及作用机制研究

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lnc RNA是生物体内一类长度大于200 nt,不具有蛋白编码能力的RNA,它能够通过多种方式调控植物的生理过程。蓝莓是一种小浆果作物,果实中含有丰富的花青苷,具有重要的保健功能。蓝莓种子对于新品种选育,优良砧木的培育具有重要的意义,然而,目前关于蓝莓中lnc RNA调控种子萌芽的研究还没有报道。本研究首次对影响蓝莓种子萌芽的lnc RNA进行挖掘,通过生物信息学分析、组织表达分析以及实时定量等方法,对其调控机制进行了初步探究,主要研究结果如下:1.从蓝莓数据库中挖掘了一个lnc RNA(Vclnc RNA001),通过生物信息学对Vclnc RNA001进行了验证,结果表明Vclnc RNA001不具有完整的ORF,氨基酸残基仅有39 aa,表明Vclnc RNA001不具有编码能力,是一个lnc RNA,结合它在基因组上的位置以及与编码蛋白之间的关系表明,Vclnc RNA001是一个反义lnc RNA。2.获得了Vclnc RNA001异源过表达的转基因拟南芥植株;并对Vclnc RNA001进行组织表达特异性分析,Vclnc RNA001在种子中的表达量最高,明显高于其他组织。3.在盐胁迫、干旱胁迫、ABA胁迫下,转基因拟南芥种子具有子叶脱壳缓慢甚至难以脱壳以及脱壳后,子叶黄化的表型;在盐胁迫、干旱胁迫、ABA胁迫下,Vclnc RNA001能够延迟和降低种子萌芽和绿苗。4.对Vclnc RNA001进行盐胁迫处理,然后进行转录组测序,获得差异表达基因,挑选一些与ABA通路、GA通路等相关的基因进行q PCR验证。5.获得Vclnc RNA001的自然反义转录本Vclnc RNA001-AS,对Vclnc RNA001-AS进行基因克隆,在盐胁迫条件下,Vclnc RNA001-AS能够增强种子萌芽和绿苗时的抗盐性;在ABA胁迫条件下,Vclnc RNA001-AS能够提高绿苗率;在干旱胁迫条件下,Vclnc RNA001-AS对种子萌芽和绿苗没有影响;完成盐胁迫条件下WT、Vclnc RNA001、Vclnc RNA001-AS+Vclnc RNA001、Vclnc RNA001-AS萌芽和绿苗实验;Vclnc RNA001-AS能够降低Vclnc RNA001的表达量,并且能有效缓解Vclnc RNA001对种子萌芽、绿苗的抑制;在盐胁迫条件下,Vclnc RNA001和Vclnc RNA001-AS可能通过提高NCED3,ABI4的表达量来调控种子萌芽和绿苗。这些研究结果对于丰富蓝莓基因资源以及为蓝莓的引种栽培、优良砧木的培育、新品种选育奠定了坚实基础,因此,对于Vclnc RNA001的鉴定以及研究盐胁迫下Vclnc RNA001对种子萌芽的调控机理具有十分重要的理论和现实意义。
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