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2002年底，浙江、福建两省出现番鸭禽流感疫情，病禽表现出明显的神经症状，脑组织有特征性灰白色坏死灶，与先前禽流感特征症状及病变有异。为研究这数起新发生病例的病原特性，探明流感的进化趋势，我们进行了病毒HA基因的分析以及病毒对实验动物致病性的研究。 将分离自脑炎病变型禽流感病死番鸭的四株H5N1亚型禽流感病毒LH株、ZA株、LSD株和LSM株分别接种于12日龄非免疫鸡胚，收取正常死亡胚尿囊液，差速离心后超离浓缩病毒，获得大量高浓度高纯度的病毒液。提取病毒RNA后，经一步法RT-PCR扩增出HA基因的cDNA，连接入pGEM-T质粒载体，转化大肠杆菌DH5α，克隆后阳性产物测序分析。结果显示，四病毒株HA核苷酸序列均为1732bp，开放阅读框1707bp，编码568个氨基酸。对其氨基酸序列进行分析，蛋白酶裂解位点序列除LH株为GKRKKR外，其余三株为RRRKKR，为高致病性禽流感病毒的特征序列；潜在N-糖基化位点LH株在170aa-172aa处增加了NNT位点，LSD株在该处增加了NST，LSM株在260aa-262aa处增加了NGS，潜在O-糖基化位点LH株在171aa-174aa丢失一SAYP位点，而在157aa-158aa增加一PS位点，LSD株在171aa-174aa处从SAYP突变为STYP，其余未见有糖基化位点的增加和消失；四毒株受体结合位点的序列也与高致病性禽流感病毒参考毒株相同。软件分析四毒株间的亲缘关系，其氨基酸同源性为96.1％～98.6％。将其与其它禽流感病毒参考株和相似病毒进行氨基酸序列同源性比较发现，实验株与国内四株鸭源禽流感病毒及HK97、GD96高度同源，有95.1％～98.6％的同源性，而与其它H5亚型毒株同源性85.6％～94.3％；构建的基因进化树显示，四株病毒被分为两侧枝，与国内另六株构成一个亚支，位于欧亚种系一支内，独立于其它北美分离株。 选取实验株中的两株(LH和LSD)作病毒的致病性试验，分别接种鸡、鹅、鹌鹑、肉鸭、蛋鸭和鸽，并选取两株国内H5N1亚型高致病性鸭源毒株(NJ和SH)作为对照试验组，观察其临床症状、病理变化和体内抗体水平。结果表明，两组病毒均能高度致死鸡、鹅和鹌鹑(死亡率可高达100％)，对肉鸭和蛋鸭的致死率有一定的差异，从16.7％到83.3％不等。实验动物主要表现出精神沉郁，厌食，腿、脚蹼有红紫斑等外观变化，死后剖检可见轻重程度不等的皮下、内脏组织器官的出血、淤血、肿大／萎缩和坏死，观察鸭的显微病变，也以细胞的变性、坏死以及一11-出血淤血为主，其中，免疫器官的严重损伤尤其明显。致病力试验结果表明，四毒株对鸡、鹤鹑和鹅具高致病力，对鸭具低致病力，对鸽无致病力。不同毒株对不同动物、同一毒株对不同动物的致病力都有所不同，实验组毒株致病力较强，死亡率明显高于对照组，病变也相对较严重。 研究结果表明，四株脑炎病变型毒株均为高致病性禽流感病毒，且毒力有所增强。毒株HA基因产生了一定的变异，在分子进化上属于欧亚种系，与国内毒株亲缘关系近于国外分离株。