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1,3-二羟基丙酮(Dihydroxyacetone, DHA)作为一种重要的中间体广泛应用于工业和医药行业。目前其主要采用葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter)和醋酸杆菌(Acetobacter)属的微生物通过甘油转化生产。本文对实验室分离筛选到的一株DHA高产WD菌株进行微生物学鉴定，并初步优化了其培养和发酵条件。最后对与DHA合成相关的山梨醇脱氢酶进行验证。主要研究内容与结果如下：1、对WD菌株进行形态学观察和生理生化特性鉴定，结合16S rDNA序列分析和系统发育信息，根据多相分类的原则，鉴定WD菌株为氧化葡萄糖酸杆菌，并定名为Gluconobacter oxydans WD。2、对G. oxydans WD的摇瓶培养和发酵条件进行初步优化。选用山梨醇或山梨醇和甘油的混合物作为种子培养的碳源，在酵母粉用量为20g L-1时，菌浓为6.0(OD600)；采用100g L-1的甘油进行DHA摇瓶发酵，在酵母粉浓度30g L-1，CaCO3用量5.0g L-1，接种量5%时，DHA产量为95g L-1。进行分批和补料分批发酵罐实验。DHA产量由摇瓶时的95g L-1提升到分批发酵的120g L-1；在补料分批发酵时DHA产量进一步增加到140g L-1。3、克隆的G. oxydans WD的基因与G. oxydans621H的山梨醇脱氢酶基因sldB和sldA在序列上高度相似。亚克隆G. oxydans WD的山梨醇脱氢酶基因并在Escherichia coli中进行活性验证。E. coli C43在同时含有sldB和sldA时具有转化甘油合成1,3-二羟基丙酮的能力。此外以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein，EGFP)作为报告蛋白对sldB末端的sldA的SD相关序列进行验证，该SD序列与载体pET28a的SD序列在活性上没有明显区别，EGFP的蛋白表达情况基本相同。SD之后的间隔序列对EGFP的蛋白表达具有重要影响。