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目的建立低分化特性人成骨肉瘤MG-63克隆细胞株,为研究骨肉瘤细胞分化研究提供良好的实验模型;用全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)对人低分化骨肉瘤细胞株(MG-63)进行干预,检测低分化骨肉瘤细胞良性分化的特性,并探讨其恶性逆转的分子机制。方法通过体外的克隆技术,细胞计数法筛选并建立了6个单克隆细胞株,利用软琼脂克隆形成实验、染色体分析、细胞周期时相分析、及DNA含量和碱性磷酸酶的活性测定,比较、分析和鉴定各单克隆细胞株的分化特性,筛选出1 8号低分化骨肉瘤细胞株;用MTT法、透射电镜、流式细胞仪、RT-PCR、体外侵袭实验、DNA琼脂糖凝胶电泳实验、Western blot等检测1μmol/L的ATRA处理后18号骨肉瘤细胞株良性分化的特性并探讨了其恶性逆转的分子机制。结果共得到23个单克隆细胞株,其中的5、18号细胞株具有明显差异。18号为大核长梭形细胞,无接触抑制,克隆形成率高,DNA超二倍体,染色体众数集中在70～78之间,碱性磷酸酶活性低;代表低分化的骨肉瘤细胞株。ATRA处理后低分化骨肉瘤MG-63细胞的增殖受抑制,细胞出现了形态和功能的良性分化,细胞周期堆积于G1期,癌基因增殖细胞核抗原PCNAmRNA、黏附分子CD44v6mRNA、DNA甲基转移酶DnmtmRNA的表达水平降低,抑癌基因P16mRNA的表达水平增高,蛋白激酶C(PKC)和细胞周期素D(Cyclin D1)的蛋白表达下调,骨肉瘤细胞的侵袭能力下降,抗失巢凋亡的特性丧失。结论通过体外克隆技术、细胞生长曲线测定,DNA含量和染色体分析及琼脂克隆形成实验相结合的方法,可建立不同分化特性的MG-63克隆细胞株;ATRA对人骨肉瘤细胞株有诱导分化作用,处理后的低分化骨肉瘤细胞出现成熟分化特性,分别在基因水平,细胞周期调控及细胞信号传导上阐明了Dnmt在骨肉瘤细胞株诱导分化过程中活性调节的重要性及分子机制,认为抑制Dnmt的活性是ATRA诱导骨肉瘤细胞分化的重要机制之一。